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Cubilin在白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达MCP-1、RANTES中的作用
目的探讨白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达细胞趋化因子的分子机制.方法免疫组织化学方法检测10例肾病综合征患者和8例单纯血尿患者肾组织白蛋白沉积和MCP-1、RANTES的表达,常规染色观察肾组织病理改变.以DOTAP分别将空载体、正义或反义Cubilin核酸转染至HK2细胞,荧光显微镜观察HK2细胞对白蛋白的摄取情况,Western blot检测HK2细胞Cubilin、MCP-1和RANTES的表达变化.结果对照组肾组织中肾小管上皮细胞胞浆可见少量白蛋白沉积,MCP-1、RANTES有微弱表达;肾病综合征组肾小管上皮细胞胞浆可见大量白蛋白颗粒,MCP-1和RANTES表达明显增强,并可见肾间质单个核细胞浸润等组织学改变.体外实验,与正义Cubilin组、空载体组和DOTAP组比较,反义Cubilin组Cubilin 表达显著下调,HK2细胞的白蛋白吞饮以及MCP-1、RANTES的表达减少.结论肾小管上皮细胞对白蛋白的重吸收增加可能与其趋化因子表达上调有密切关系,其中Cubilin可能具有重要作用.
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白蛋白活化肾小管上皮细胞对肾小管周微血管的影响及机制研究
目的 探讨人类血清白蛋白(HSA)超负荷损伤肾小管上皮细胞后对肾间质微血管损伤的影响及可能机制.方法 激光共聚焦显微镜观察肾小管上皮细胞(HKC)吞饮罗丹明标记白蛋白(TRITC-BSA)以及吞饮受体cubilin siRNA对其的抑制效应.氢化乙锭标记的荧光探针检测白蛋白刺激HKC产生O2-以及白蛋白吞饮受体cubilin siRNA和线粒体呼吸链复合物I抑制剂鱼藤酮对HKC产生O2-的抑制作用.培养上清H2O2采用化学比色方法检测.倒置显微镜下观察HSA激活的HKC以及cubilin siRNA或鱼藤酮预处理的HKC与脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养后血管内皮管样结构形成情况.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定内皮细胞活力.用流式细胞仪以AnnexinV FTTC/PI双染法检测内皮细胞凋亡率.结果 (1)cubilin siRNA可显著抑制HKC吞饮白蛋白(P＜0.05).(2)HSA刺激HKC产生ROS呈剂量及时间依赖性(P＜0.05);cubilin siRNA及鱼藤酮均可抑制白蛋白超负荷诱导HKC产生大量ROS(P＜0.05).(3)HKC与HUVEC共培养体系中,HSA活化的HKC抑制内皮细胞管样结构的形成,内皮细胞增殖显著减少(P＜0.05),细胞凋亡率显著增高(P＜0.05);而cubilin siRNA和鱼藤酮干预组内皮细胞管样结构数及内皮细胞活力显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).结论 白蛋白可通过吞饮受体cubilin激活肾小管上皮细胞线粒体呼吸链复合物I产生大量ROS,后者可能是慢性肾病时大量蛋白尿活化肾小管上皮细胞进而损伤肾小管周微血管网的重要介质.
