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亚砷酸钠对人支气管上皮细胞的氧化损伤作用
目的 探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响.方法 体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50000 μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定细胞活性；加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞DNA链断裂情况.结果 与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HBE细胞内ROS、MDA含量和Olive尾矩均显著升高,细胞存活率和SOD活力均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HBE细胞内MDA、ROS含量和Olive尾矩均呈明显的上升趋势(P＜0.05),细胞存活率和SOD活力均呈明显的下降趋势(P＜0.05).结论 亚砷酸钠可以诱导HBE细胞氧化损伤增加,提示氧化应激可能是亚砷酸钠致HBE细胞毒作用机制之一.
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铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制.方法 体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组(12.5、25、50、100、200 μg/ml).细胞染毒12h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bc1-2相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(Cyt C)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)的蛋白表达.结果 当铀矿尘浓度为25～200 μg/ml时,HBE细胞存活率均低于对照组,细胞凋亡率和坏死率均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).随着铀矿尘浓度的升高,HBE细胞Bax、Bcl-2、Cyt C、caspase-3、caspase-9蛋白表达量逐渐增加,均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 铀矿尘对HBE细胞的凋亡作用可能是通过线粒体途径实现的.
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三乙胺对HBE细胞的氧化损伤作用
目的 探讨三乙胺对永生化人支气管上皮细胞(HBE)的氧化损伤作用.方法 体外培养HBE细胞,在6个不同染毒浓度(0、5、7.5、10、15、20 mmol/L)和4个不同染毒时间段(6、12、24、48 h)的条件下染毒HBE细胞,CCK-8试剂盒检测三乙胺对HBE细胞存活率的影响;收集细胞后装载探针检测细胞活性氧(ROS)的含量;同时通过单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测细胞DNA链断裂情况.结果 在相同染毒时间段内,HBE细胞的存活率随着染毒浓度的增加而下降,各浓度组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),且呈明显的剂量-效应关系;随着染毒浓度的增加,HBE细胞ROS含量明显上升,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SCGE实验结果表明,各组HBE细胞Olive尾距随染毒浓度增加明显增加,呈现明显的剂量—反应关系,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 三乙胺可降低HBE细胞存活率,诱导HBE细胞产生自由基从而引起DNA损伤.
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γH2AX和53BP1蛋白在肺正常上皮细胞DNA氧化损伤反应中的表达
目的 探讨肺正常上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)中磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX,γH2AX)和p53结合蛋白1(p53-Binding protein 1,53BP1)在DNA氧化损伤反应中的表达.方法 用0、25、50、100、200、400μμmol/L过氧化氢(H2O2)处理HBE细胞1h,对其造成氧化损伤引起DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs);CCK-8比色法检测H2O2对HBE细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测HBE细胞核内γH2AX和53BP1蛋白的聚集情况,western blot检测γH2AX、53BP1、BRCA1蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,25 μmol/L H2O2处理组细胞活性(1.07±0.01)升高,50、100、200、400 μmol/L H2O2处理组细胞活性(分别为0.97±0.01,0.96 ±0.01,0.95±0.01和0.94±0.01)降低,差异具有统计学意义(F=50.35,P＜0.01).细胞凋亡检测结果显示,与对照组[(4.65±0.32)％]比较,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞凋亡率[分别为(7.54±0.57)％、(7.84±0.68)％、(8.40±0.50)％和(14.03±1.03)％]升高(F=35.879,P＜0.01).与对照组比较,经25、50、100、200、400 μmol/L H2O2处理后γH2AX的平均荧光强度升高(F=223.97,P＜0.01),而经50、100、200、400 μmol/L H2O2处理后53BP1的平均荧光强度降低(F=117.78,P＜0.01);western blot结果显示,随着H2O2浓度升高,γH2AX蛋白表达水平升高,BRCA1和53BP1的表达水平下降,差异均具有统计学意义(F分别为96.20,11.55,21.92,P均＜0.01).结论 在H2O2导致HBE细胞的氧化损伤中,γH2AX可作为DNA氧化损伤标志物,但53BP1的表达下降提示HBE细胞可能通过其他途径进行DNA氧化损伤的修复.
关键词： 磷酸化组蛋白H2AX p53结合蛋白1 DNA双链断裂 氧化应激 HBE细胞 -
橄榄苦苷抑制丙烯醛诱导的HBE细胞内质网应激的机制研究
目的:探讨橄榄苦苷(oleuropein,OP)和丙烯醛(acrolein,ACR)对人支气管上皮样细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)内质网应激(endouplasmic reticulum stress,ERS)相关的增殖与凋亡影响的可能机制.方法:OP与ACR联合处理HBE细胞,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法和流式细胞检测细胞凋亡,Western blot检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA表达;雄性Sprague-Dawley大鼠经ACR腹腔注射和(或)橄榄叶提取物(o-live leaf extract,OLE)灌胃处理,取大鼠肺组织,Western blot法检测ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA表达.结果:体外实验证实ACR可以抑制HBE细胞的增殖,诱导其凋亡;联合OP处理后,ACR抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用明显受到抑制;同时,ACR上调HBE细胞中ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,联合OP可抑制GRP78和CHOP的表达;在mRNA水平上,ACR单独处理上调了ERS相关分子GRP78和CHOP的mRNA表达水平,而联合OP处理,GRP78和CHOP的mRNA水平未见明显变化;Sprague-Dawley大鼠体内实验结果与体外细胞实验基本一致.结论:ACR抑制HBE细胞增殖,促发ERS,进而诱导HBE细胞凋亡.在蛋白质翻译水平上,OP可以通过抑制ERS途径,拮抗ACR诱导的细胞凋亡效应.
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鲍曼不动杆菌通过活化血小板激活因子受体引起感染人支气管上皮细胞的氧化应激和细胞凋亡
目的 探讨血小板激活因子受体(PAFR)在鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染人支气管上皮(HBE)细胞过程中的作用.方法 HBE细胞分为对照组、银杏内酯B(GB)处理组、A.baumannii感染组、A.baumannii感染联合GB处理组.使用临床分离的A.baumannii感染HBE细胞,GB处理组分别用1×103 CFU/mL、1×105 CFU/mL和1×107 CFU/mL的A.baumannii感染HBE细胞,A.baumannii感染联合GB处理组则先用10 μmol/L GB阻断PAFR活性而后进行1×103 CFU/mL A.baumannii感染.采用Western blot法检测HBE细胞PAFR、磷酸化的Janus激酶1(p-JAK1)、磷酸化的信号转导子与转录激活子1(p-STAT1)的蛋白水平,使用CCK-8法检测细胞增殖能力,使用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各组细胞氧化应激水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,A.baumannii感染的HBE细胞中PAFR蛋白水平显著升高,细胞活力显著下降,细胞内MDA水平和细胞凋亡明显增加,p-JAK1和p-STAT1蛋白水平增加.结论 A.baumannii感染的HBE细胞PAFR活化,激活JAK1/STAT1信号通路促进HBE细胞的氧化应激和细胞凋亡.
