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CYP2C9基因沉默细胞株构建及其对三氯乙烯毒性的影响
目的 建立细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因沉默正常肝细胞株(L02)并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA)将其连接到PLVX-shRNA2P质粒中构建CYP2C9 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9沉默细胞株.分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株染毒24 h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组即0 mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株细胞周期的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化.结果 酶切和测序结果证明插入PLVX-shRNA2P载体的CYP2C9基因干扰序列与设计的shRNA序列一致.CYP2C9沉默细胞株的CYP2C9 mRNA和蛋白相对表达水平分别较shRNAc沉默对照细胞下降76.0％和78.6％.TCE染毒后,0.5、2.0、8.0 mmol/L3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞和L02细胞周期没有发生显著变化.TCE染毒后,2.0和8.0 mmo]/L染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞,而0.5、2.0、8.0 mmol/L 3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的caspase-3表达水平没有显著变化.结论 三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉默细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系.
关键词： 细胞色素氧化酶P450 2C9 三氯乙烯 基因沉默 凋亡基因 -
细胞色素氧化酶P450 2C9基因多态性与冠心病及血脂水平的关系
目的 探讨细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因多态性与冠心病和血脂水平的相关性.方法 应用聚合酶链反应和基因测序方法,检测218例经冠状动脉造影确诊冠心痛或有明确心肌梗死的患者及200例经冠状动脉造影排除冠心病的对照者的CYP2C9基因型,并对突变基因型者和野生基因型者的血脂按常规方法测定并进行比较分析.结果 冠心病组突变型CYP2C9*3基因发生率显著高于非冠心病对照组(P<0.05),突变型CYP2C9*3基因型者和野生型CYP2C9*1基因型者血脂水平差异无统计学意义.结论 CYP2C9基因多态性与冠心痛的发生可能相关,但未发现与血脂水平有相关性.
关键词： 细胞色素氧化酶P450 2C9 基因 多态性 冠心病 血脂水平 -
CYP2C9基因高表达细胞株对三氯乙烯毒性影响
目的 建立细胞色素氧化酶P450 2C9 (CYP2C9)基因高表达肝细胞株(L02),并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 PCR扩增CYP2C9基因并将其克隆到慢病毒表达载体中,然后转染293T细胞,收集病毒上清,感染正常L02细胞.采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9高表达细胞株.分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株染毒24 h,同时设置二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组即0 mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株细胞增殖能力的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化.结果 酶切和测序结果证明CYP2C9基因成功插入PCDH-MCS-EF1-GFP-T2A-PURO载体.CYP2C9高表达细胞株的CYP2C9 mRNA和蛋白相对表达水平分别较对照普通L02细胞升高107.3％和257.9％.TCE染毒后,2.0、4.0、8.0、16.0mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞抑制率与L02细胞相比,低于相同浓度TCE处理的L02细胞.TCE染毒后,通过荧光定量PCR和WB检测,发现TCE 2.0和8.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞的Bcl-2表达水平低于相应染毒剂量组L02细胞,而TCE 0.0、0.5、2.0、8.0 mmol/L剂量组CYP2C9基因高表达细胞的caspase-3表达水平高于普通L02细胞.结论 三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉高表达细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系.
关键词： 细胞色素氧化酶P450 2C9 三氯乙烯 基因高表达 凋亡基因 -
细胞色素氧化酶CYP2C9基因多态性及其与心血管药物代谢及疾病关系研究进展
细胞色素氧化酶P450 2C9是人类肝脏中一种重要药物代谢酶,代谢约10%临床上常用药物,包括一些心血管系统疾病的用药.细胞色素氧化酶P450 2C9基因具有高度多态性,在基因编码区和非编码区存在许多单碱基突变,这种基因多态性对心血管系统疾病的一些重要用药的代谢差异产生重要的影响,并可能和某些疾病的发生相关.
关键词： 细胞色素氧化酶P450 2C9 基因多态性 药物代谢 疾病
