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塔斯品碱衍生物TasD1-6对肝癌Hep3B细胞生长的抑制作用研究
目的 考察塔斯品碱衍生物TasD 1-6对肝癌细胞株Hep3B、HepG2和BEL7402的生长抑制作用及其作用机制.方法 应用MTT法和实时细胞分析(RTCA)技术检测TasD 1-6对Hep3B、HepG2和BEL7402细胞增殖的影响,筛选敏感株后采用结晶紫染色进行细胞形态学观察,根据Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst 33258染色法考察TasD1-6对细胞凋亡的影响,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 MTT法和RTCA结果均表明TasD1-6能明显抑制Hep3B细胞的增殖,MTT检测其半数抑制浓度(IC50)值为(11.3±1.6) μmol/L,确定后续给药浓度分别为3、6、12 μmol/L;形态学观察结果表明TasD1-6高浓度下能明显抑制Hep3B细胞增殖,且细胞皱缩,形态发生明显变化;Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst33258染色法均表明TasD1-6可诱导细胞发生凋亡,且呈剂量依赖性;Western blotting结果表明TasD1-6可上调p53和促凋亡蛋白Bax表达,并下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达;流式细胞仪检测细胞周期表明TasD 1-6可将Hep3B细胞阻滞于G1期.结论 TasD1-6可抑制肝癌细胞增殖,其对Hep3B细胞作用为显著,其作用机制可能为通过上调p53和促凋亡蛋白Bax,下调抑凋亡蛋白Mcl-1诱导细胞凋亡的产生,同时将细胞周期阻滞于G1期,抑制细胞增殖.
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尖叶假龙胆有效成分的活性追踪分离及对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用研究
目的 从尖叶假龙胆不同极性部位中寻找对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有较强保护作用的化合物.方法 采用活性追踪分离的方式,通过H2O2诱导PC12细胞损伤建立氧化应激损伤模型,利用实时细胞分析技术(real-time cell analysis,RTCA)研究尖叶假龙胆不同极性部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用;采用HPLC法测定具有活性的单体化合物的质量分数,并确定其化学结构.结果 尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.同时,从尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位中分离得到的化合物1、2、3、5也对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.其中化合物1和2的保护作用在3.125～50.000 μmol/L呈一定剂量依赖性,浓度为50.000 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强;而化合物3和5的保护作用在3.125～50.000μmol/L内不具有剂量依赖性,浓度分别为25.000、3.125 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强.经结构鉴定,化合物1、2、3、5分别为雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮、当药醇苷及去甲基当药醇苷.结论 化合物1、2、3、5对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,可能是尖叶假龙胆抗氧化的主要活性成分.
