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天然药物化学史话:岩沙海葵毒素的全合成
岩沙海葵毒素(palytoxin,PTX)是从海洋生物软体珊瑚Palytoa toxicus中发现的具有非常复杂且结构新颖、特殊的天然有机化合物,其化学全合成的成功令化学家叹为观止.主要对岩沙海葵毒素全合成战略做简要介绍.
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岩沙海葵毒素人工抗原的合成及鉴定
目的制备岩沙海葵毒素(PTX)的人工抗原和抗血清,为建立PTX的酶联免疫检测方法提供技术基础.方法用小分子succinimidyl 3-(2-pyridyldithio) propionate(SPDP)将PTX巯基化成半抗原PTX-PDP,用2-iminothiolane将大分子载体蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)巯基化成KLH-SH,再将PTX-PDP和KLH-SH反应合成人工抗原PTX-PDP-KLH免疫雌性6～8周龄Balb/c小鼠,进行多抗的制备.用同样的方法制备酶联免疫反应之包被抗原PTX-PDP-BSA,用于检测血清抗体效价.结果根据紫外检测图谱,PTX的大吸收波长在264 nm处,KLH及BSA的大吸收波长在278及279 nm处,而合成的人工抗原PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的大吸收波长分别在267和273 nm处.抗血清经间接酶联免疫吸附法检测,效价达到1∶3 200,且与正常Balb/c小鼠、昆明种小鼠及兔血清间无交叉反应.结论合成的人工抗原纯度高,具有较好的免疫原性.
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岩沙海葵毒素单克隆抗体的制备及其鉴定
目的 建立岩沙海葵毒素(Palytoxin,PTX)高特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株. 方法将PTX偶联成具有免疫功能的PTX-PDP-KLH完全抗原,免疫雌性6～8周龄Balb/c小鼠,利用传统杂交瘤技术制备FIX单克隆抗体,并通过间接酶联免疫吸附测定(ELIA)方法筛选克隆阳性杂交瘤细胞株. 结果获得能稳定分泌抗PTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株B8,与载体蛋白没有发生交叉反应.SDS-PAGE分析表明,McAb B8在50KD和25KD处各出现一条条带,与IgG的重链和轻链的大小相符. 结论研究制备了特异性单克隆抗体PTx,为进一步建立快速检测、鉴定海产品中岩沙海葵毒素的方法,奠定有效的实验基础.
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岩沙海葵毒素直接酶联免疫吸附检测方法的研究
[目的]制备岩沙海葵毒素(PTX)多抗血清,纯化并标记辣根过氧化物酶,建立PTX多克隆直接酶联免疫吸附检测方法.[方法]将纯品毒素PTX与大分子蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)分别巯基化,用化学法偶联二者成为半抗原,以其诱导BALB/c小鼠产生多价抗血清;以辣根过氧化物酶(HRP)标记PTX多抗血清;以PTX纯毒素作为包被抗原,HRP标记的多价抗血清为酶标抗体,建立PTX多抗直接ELISA检测方法.[结果]制备的抗PTX多价抗血清,经纯化后与HRP标记成功;建立的PTX多抗直接ELISA检测法,其佳工作浓度为1:80.[结论]本研究制备的PTX人工免疫抗原具有较高的特异性和免疫原性,多克隆抗体为特异性抗PTX抗体,PTX多抗直接ELISA检测法对PTX的检测可达到5～10ug水平,该法应用于海产品中PTX快速检测的结果,待进一步研究.
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海洋生物岩沙海葵毒素血清免疫抗体的制备
[目的] 为建立岩沙海葵毒素(PTX)的酶联免疫快速测试方法提供特异性免疫抗体.[方法] 巯基化标准PTX成半抗原PTX-PDP;巯基化匙眼血蓝蛋白(KLH)成KLH-SH,两者合成反应人工抗原PTX-PDP-KLH.用PTX-PDP-KLH免疫雌性6～8周龄Balb/c小鼠,制备PTX多克隆抗体.用同样方法制备包被抗原PTX-PDP-BSA,用以检测血清抗体效价.[结果] 紫外检测标准品PTX的大吸收波长在264nm处,纯品KLH及BSA的大吸收波长在278nm及279nm处,小鼠血清多克隆抗体PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的大吸收波长分别在267nm和273nm处.抗血清效价达到1:3200 ,与正常Balb/c小鼠、昆明小鼠及兔血清间无交叉反应.[结论] 合成的PTX人工抗原纯度高,成功制备PTX多克隆抗体血清.
