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梅花鹿鹿茸中促PC12细胞增殖蛋白的分离和活性研究
目的 对冻干鹿茸水溶性组分进行分离,并考察鹿茸水溶性组分及其分离组分对PC12细胞的促增殖活性.方法 应用S-200分子筛凝胶液相色谱和DEAE阴离子交换液相色谱分离鹿茸水溶性组分,进行蛋白质SDS-PAGE电泳分析,Folin-酚法测定鹿茸样品中的蛋白,并用MTT法测定PC12细胞增殖率.结果 鹿茸水溶性组分在13.3 mg/mL能促进PC12细胞增殖47%(P<0.01),其蛋白质量分数为84.2%;经分子筛色谱分离的S200-P2组分具显著促PC12细胞增殖活性(46.0%,97.0μg/mL,P<0.01);经离子交换色谱进一步分离的DEAE-P1组分在51.0/μg/mL下的PC12细胞的增殖率为111.5%(P<0.001).DEAE-P1组分的蛋白主要集中分布于Mr56 000和大于Mr 100 000处.结论 冻干鹿茸的水溶性组分及其液相色谱分离的一个大分子蛋白组分具有显著的促PC12细胞增殖活性,提示这个组分与鹿茸的神经生长因子样活性相关.
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野生型金黄色葡萄球菌肠毒素C2在E. Coli中的表达和纯化研究
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因在E.coli重组表达,纯化重组SEC2(rSEC2)并进行生物学活性分析.方法 PCR获得正确编码SEC2的基因片断,构建表达质粒pET -28a-sec2在E.coli BL21中表达.利用离子交换和分子筛色谱纯化rSEC2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法对rSEC2和天然SEC2(nSEC2)生物学活性进行分析和比较.结果 可溶性rSEC2占菌体总蛋白质的40%,两步纯化后蛋白质纯度约达9 5%,rSEC2和nSEC2均具有显著的超抗原活性.结论 成功获得与nSEC2有着类似活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白质的抗肿瘤机理奠定物质基础.
