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青蒿琥酯对体外人癌细胞HeLa、SACC-83细胞增殖的影响
青蒿琥酯是青蒿素的衍生物，为二氢青蒿素的12-α-琥珀酸酯钠。青蒿琥及其衍生物具有抗疟疾、抗焦虫、抗血吸虫及抗肿瘤等药理活性以及临床的疗效。其抗疟机制被认为是该药化学结构含有过氧桥，在代谢过程中产生自由基的构效特点，使红细胞O2和H2O2活性氧浓度升高［1］。鉴于该化学结构中含有过氧桥，在组织有可能释放氧的机制。我们研究了青蒿琥酯对体外培养的人癌细胞系HeLa、SACC-83细胞增殖的影响。1 材料1.1 药物及试剂：青蒿琥酯，广西桂林制药二厂提供，白色粉剂，用前溶于2 mL 5%NaHCO3溶液中，经过滤除菌，用RPMI-1640培养液稀释。MISO，放射增敏剂，中科院生物物理研究所沈洵教授惠赠，用前溶于RPMI-1640，过滤除菌后，终浓度为1×10-3 mol/L。MTT, Gibco 公司产品，临用前现配制。DMSO(二甲基亚砜)，Gibco公司产品。1.2 仪器：德国贺利氏CO2培养箱，日本Olympus倒置显微镜，芬兰Labsystem MS MK3 ELISA检测仪。1.3 细胞系及培养条件：人肝癌细胞系BEL-7402，北京市肿瘤医院研究所提供。人乳癌细胞系BCH，人胃癌细胞系MGC-803，北京市肿瘤医院研究所提供。人涎腺样囊性癌细胞系SACC-83，北京医科大学口腔医学院提供。人舌鳞癌细胞系TC-83，天津医科大学肿瘤医院提供。人宫颈癌细胞系HeLa，本生物技术室提供。2 实验方法2.1 细胞敏感筛选实验：各细胞系传代至指数增殖期，经扩增培养，胰酶-EDTA消化后，计数后配成5×104 cfu/mL。接种于96孔板，培养液为15% FCS RPMI-1640， 5% CO2，37 ℃下培养，试验组分别加入青蒿琥酯(终浓度为6.25，12.5，25，50，100 μg/mL)，对照组细胞加入RPMI-1640，继续培养48 h，在终止前4 h，换成无血清PRIM-1640液，加入MTT 2 mg/mL，培养4 h，移液，加入DMSO，振荡，Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测各细胞系的吸光度(A)。2.2 细胞增殖MTT分析实验：指数增殖期细胞接种，细胞数2×105 cfu/mL，5% CO2，37 ℃，孵育4 h，待贴壁，HeLa细胞系青蒿琥酯12.5～100 μg/mL浓度范围，SACC-83细胞系青蒿琥酯25～100 μg/mL浓度范围，不同浓度药物分别与培养20，44，68 h的细胞接触，于不同时期(20，44，68 h)按Mosman法［2］，采用Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测两种细胞系的A值。2.3 统计学处理：按t检测比较实验和对照各组的A值(细胞生存)，采用线性回归计算IC50。
