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银杏悬浮细胞系选育及继代培养中银杏内酯合成稳定性研究
目的选育高产银杏内酯悬浮细胞系,并对其在继代培养过程中银杏内酯B合成的稳定性进行研究.方法以银杏优良品种的种子萌发幼苗诱导愈伤组织,考察了不同培养基对愈伤组织生长和银杏内酯B产生的影响,采用缺氧胁迫法从诱导的愈伤组织中选育高产银杏内酯B悬浮细胞系,并进行驯化培养.结果选出了7个细胞系,其合成银杏内酯B的能力比选育前的愈伤组织有了显著提高,其中细胞系MH-3培养周期18 d,细胞生物量增加3.71倍,银杏内酯B含量达到302 μg/g DW,比选育前提高了1 72.7%,为国内领先水平.在摇瓶培养时其合成银杏内酯的能力稳定,连续培养6代,银杏内酯B的平均含量为291μg/g DW,变异系数为0.1 31.结论采用该路线选育的银杏悬浮细胞系银杏内酯B产量高,在继代培养过程中合成代谢较稳定.
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非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响
目的 探讨非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响.方法 以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定佳培养时间,并将纤维素酶(cellulase R-10)和果胶酶(pectinase Y-23)按2∶1(质量比)混合分别酶解悬浮细胞18、21、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定佳酶解时间.分别以愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率.结果 悬浮细胞培养8d细胞增殖率大,细胞活力93.8％；4％(质量分数)纤维素酶和2％(质量分数)果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2％,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5％.以不同组分培养基培养原生质体,早于第6天在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂；第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用.结论 以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8d并以4％(质量分数)纤维素酶和2％(质量分数)果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体；愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖.
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宿主细胞系用于病毒性疫苗生产初期可行性的比较
为了缩短病毒疫苗研究和生产的时间，应以宿主细胞系作为表达系统来生产抗多组病毒病原体的病毒性疫苗。选择的作为表达系统的各细胞系，就其对于脊灰病毒、A型流感病毒和呼吸道合胞病毒（野生型株A2）复制作用的初期可行性进行比较。研究了6个贴壁细胞系（ Vero、HEK-293、MRC-5、CHO-K1、BHK-21 c13、MDCK ）和6个单细胞悬浮式细胞系（ CAP、AGE1、CR ．HS、sCHO-K1、BHK-21 c132 p、MDCK SFS ）它们增殖病毒的能力。第一，测定了细胞大密度，第二，用流式细胞计量术和免疫细胞化学监测了分配有8种不同病毒受体的细胞系的病毒受体表达与极化作用。通过用编码肌动蛋白-EGFP的构建物LifeactTM 转染细胞研究了肌动蛋白细胞骨架的组织。后，测定了每一个细胞系生产所研究病毒的子代的能力。结果表明，培养于无血清培养基的单细胞悬浮细胞系是好的用于病毒复制的宿主细胞系候选者。
