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类胚体中残留胚胎干细胞数量与其致瘤性相关性的初步研究
目的 探讨类胚体(EBs)中残留未分化胚胎干细胞(ESCs)的数量与其致瘤性的相关性.方法 小鼠R1胚胎干细胞株,体外类胚体诱导分化10d,流式细胞仪检测残留未分化ESCs表面标志SSEA-1阳性率.将第10天EBs消化打散后重新给予ESCs常规培养体系培养,观察EBs中残留未分化ESCs形态,流式细胞仪检测残留细胞表面标志物;第10天EBs消化打散后以104～2×106细胞量分别注射至裸鼠四肢肌肉内,观察不同细胞数量与畸胎瘤形成的相关性.结果 ESCs分化为EBs 10 d后有(13.5±0.75)%的细胞表达SSEA-1,提示存在残留未分化ESCs.残留未分化细胞生长形态呈克隆样,高表达SSEA-1等未分化ESCs标志.EBs消化打散后仅在注射2×l06个细胞的部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织,其余各组均未见畸胎瘤的形成.结论 胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化胚胎干细胞,并需要一定细胞数量才具有致瘤性.
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小鼠羊膜干细胞的分离与培养
目的 探索小鼠羊膜细胞(mAMCs)分离、培养方法及其体外增殖分化的特性.方法 应用不同浓度胰蛋白酶及与胶原酶按不同的先后顺序作用小鼠羊膜,并采用不同的细胞接种浓度培养细胞,分别考核佳的分离及体外培养方案.免疫荧光及免疫组化法鉴定mAMCs的干细胞标志.结果 胰蛋白酶消化及与胶原酶合用顺序不同,导致收获上皮细胞与间质细胞的数量和比例明显不同,先用胰蛋白酶消化将得到较多的上皮细胞,反之先用胶原酶消化将得到较多的间质细胞.以不同浓度接种上皮和间质细胞,原代培养2w后生长曲线可见原代培养的mAMCs在y轴为对数坐标时呈长尾s型曲线.原代培养的上皮和间质细胞有较长的停滞期(2～4 d),指数增长期的细胞倍增时间间质细胞相对上皮细胞短,因此融合期时间间质细胞明显较短.接种浓度对间质细胞的生长曲线影响不大,但对上皮细胞有较大影响.在Chang medium C营养液中原代附壁培养mAMCs OCT3/4及SSEA-1阳性.结论 应用0.25％胰蛋白酶及与0.075％胶原酶作用小鼠羊膜,可获得分离的mAMCs,原代培养mAMCs干细胞标志OCT3/4及SSEA-1阳性.
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人脑胶质瘤中CD133、SSEA-1、Nestin的表达和意义
目的：研究胶质瘤干细胞标志物CD133、SSEA-1和Nestin在胶质瘤组织中表达及其与病理分级的相关性；探讨三者在人脑胶质瘤的诊断及恶性程度判断中的临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测54例脑胶质瘤组织和6例正常脑组织标本中CD133、SSEA-1及Nestin的表达。结果 CD133、SSEA-1和Nestin在胶质瘤组织中的阳性细胞平均表达率分别为25.38%、26.62%和22.39%，而在正常脑组织中均无表达。CD133、SSEA-1和Nestin阳性细胞率在胶质瘤各病理级别间比较，差异均有统计学意义，且三者的表达与胶质瘤病理级别呈正相关(P＜0.05)。SSEA-1与CD133、CD133与Nestin及SSEA-1与Nestin阳性细胞表达均呈正相关(P＜0.05)。结论检测CD133、SSEA-1、Nestin表达，有利于胶质瘤的诊断及恶性程度判断，并在胶质瘤的个性化综合治疗和预后评估发挥作用。
