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肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR载体构建及表达
目的 为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T7肽的C端连接,获得T7肽及其衍生物T2-NGR的载体.方法 通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T7肽及T7-NGR的克隆载体pMD-T7和pMD-T7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的 片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应.阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coli BL21(DE3),IFTG诱导表达.结果 酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T7和pET-T7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化.Tricihe-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1 mmol/L时,25℃诱导8 h,分别获得了T7肽和T7-NGR的表达产物.结论 已经成功构建T7肽和T7-NGR的表达载体,获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础.
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99mTc标记T7肽及其在裸鼠非小细胞肺癌模型体内的生物分布研究
背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤，针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值，本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽，薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯度与稳定性，丙酮作展开系统。测定99mTc-T7与NCI-H157细胞的亲和力。研究99mTc-T7于0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h在荷人非小细胞肺腺癌裸鼠体内的生物分布特性，并计算肿瘤（T）与非肿瘤组织（NT）放射性比值。结果99mTc对T7肽标记率高，放化纯度达90%以上，不需进一步纯化，体外稳定性好。99mTc-T7与NCI-H157细胞的平衡解离常数为196.1 nM。99mTc-T7在裸鼠体内主要通过内脏器官代谢，血液清除较快，在肿瘤部位有一定程度聚集，肿瘤/肌肉比值随时间延长而增加，可达到5以上，在4h-8h之间取值较为理想。99mTc-T7在肺内存在一过性聚集。结论99mTc-T7制备方法简便，标记率高，稳定性好，并能在肺癌肿瘤部位聚集，有望用作肺癌SPECT/CT显像剂。
