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(177)Lu标记多功能脂质体的体内生物评价及其应用研究
目的:本课题首先合成具有良好的生物学性能的脂质体,通过标记放射性同位素mLu以及包裹光学染料制备多功能分子探针,研究其体内的生物学特性与肿瘤靶向性,探讨其用于开发多模态显像纳米分子探针以及诊治一体纳米探针的潜力.方法:将螯合剂DOTA与脂质体的合成原料进行偶联,制备脂质体,裹载荧光材料并进行放射性同位素177Lu标记.通过尾静脉注射177Lu标记的脂质体,在肺癌荷瘤鼠肿瘤模型进行体内生物分布和药代动力学评价,并通过核医学SPECT成像研究.包载荧光材料的脂质体在荷瘤鼠模型进行光学成像,与核医学显像结果进行比较.本研究为今后脂质体应用于多模态分子显像,靶向放射性治疗以及放化疗联合治疗奠定了坚实的基础.
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cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞的体外抑制作用及在荷瘤鼠体内分布及显像研究
目的 探讨cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞的体外抑制作用及其在荷B16黑色素瘤细胞小鼠动物模型体内的分布及显像研究.方法 用MTT法检测不同浓度及作用时间cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞体外增殖能力的影响.采用直接标记法标记99 Tcm-c(RGD)2.建立荷B16黑色素瘤株动物模型,待肿瘤体积为1.0 ～ 1.5cm3左右时,分别于30min、1h、2h、3h、4h、5h及6h时,进行荷瘤鼠体内生物分布及动态显像研究.结果 cRGD肽二聚体浓度为500mg/L、作用48h时,对B16黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用.室温下、ρ(SnCl2·2H20)=1 g/L、反应时间为30 min时,99Tcm-c(RGD)2的标记率可达(87.42±3.21)％,标记产物经Sephadex G10分离纯化后放射化学纯度大于95％;静脉注射后30min行小鼠全身SPECT显像,肿瘤部位可见明显显像剂聚集,但肿瘤与周围组织的对比度较低;延迟至6小时肿瘤仍清晰可见,且随时间延迟肿瘤与周围组织的对比度增高,此时肿瘤/血液为2.15±0.24,肿瘤/肌肉为5.07 ±0.03.结论 该结构cRGD肽二聚体对B16黑色素瘤细胞株具有一定的体外抑制作用,且动物体内肿瘤组织摄取率高,显像清晰,证明其可进一步应用于聚合物多肽靶向药物的研发.
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99Tcm-c(RGD)2在荷不同肿瘤裸鼠体内的生物分布及显像研究
目的 利用放射性核素99Tcm标记的新型环RGD肽二聚体,即c(RGD)2,在荷人脑胶质瘤U87裸鼠、荷人肝癌细胞HepG2裸鼠、荷人宫颈癌细胞Hela裸鼠模型中进行生物分布实验及肿瘤显像研究,以探讨该探针用于整合素αvβ3受体高表达的肿瘤早期特异性诊断的前景.方法 采用氯化亚锡直接标记法将99Tcm标记于c(RGD)2,标记产物经SephadexG10分离纯化,建立荷U87、HepG2、Hela裸鼠模型,分别进行体内分布实验及肿瘤显像研究,分析99Tcm-c(RGD)2在不同肿瘤中的摄取差异.结果 99Tcm-c(RGD)2在三种肿瘤模型中,肿瘤/心脏、肿瘤/脾、肿瘤/血液比值较高.而肿瘤/肾和肿瘤/膀胱比值较低,均小于1.其余脏器组织的T/NT比值增高不明显.荷U87瘤裸鼠和荷HepG2裸鼠尾静脉注射显像剂0.5h后即可见肿瘤显影,且边界清晰.随时间延长,至6h肿瘤显影更加清晰.在荷Hela裸鼠中肿瘤显像不清晰,腹部脏器显影呈浓聚.对99Tcm-c(RGD)2在三种肿瘤中的摄取值进行方差分析,并选择常用的Bonferroni法进行进一步的两两组间比较.结果 三组间均值两两比较差异P值均＜0.05,有统计学意义.结论 99Tcm-c(RGD)2主要经泌尿系统排泄,且血液清除率快,在重要脏器如心脏、肝脏摄取较低.探针对U87和HepG2肿瘤均展示出靶向性及良好的显像特性,其中对脑胶质瘤U87有更好的生物分布及显像结果.而在Hela中显像及生物分布结果并不理想.
关键词： 99Tcm-c(RGD)2 肿瘤新生血管 生物分布 SPECT显像 脑胶质瘤 -
99Tcm标记抗PSMA单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布
目的 研究99Tcm-抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体(J591)对前列腺癌细胞体外结合性能、在荷人前列腺癌裸鼠体内生物分布.方法 用改进的Schwarz方法进行99Tcm标记,经Sephadex G-50柱分离纯化；用纸层析法和三氯醋酸法测定标记率与放化纯；用流式细胞术测定抗体与肿瘤细胞在体外的结合性能；PSMA阳性的C4-2前列腺癌裸鼠为实验组,PSMA阴性的PC3前列腺癌裸鼠为对照组,裸鼠静脉注射7.5 MBq(25μg/只)99Tcm-J591,分别于2、6、12及24h测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(％ ID/g)及T/NT比值.结果 表明99Tcm - J591标记率为(78.9±6.2)％,放化纯＞90％.J591与99Tcm - J591在体外能结合PSMA阳性的C4-2细胞,与PSMA阴性的PC3细胞不结合,显示出J591具有良好的特异性.生物分布实验显示:实验组裸鼠肿瘤部位出现99Tcm浓聚,对照组则没有.肿瘤组织百分注射剂量率(％ ID/g)在12h达高峰,为(15.91±5.16)％ID/g,与对照组(3.22±1.33)％ID/g相比差异有统计学意义(P＜0.05),其余组织和器官的百分注射剂量率在两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 J591具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位性能,可望用于前列腺癌的导向诊断及导向治疗.
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正电子发射体层摄影示踪剂11 C-乙酸的合成改进及其生物分布
目的 建立快速、有效合成正电子发射体层摄影(PET)示踪剂11C-乙酸的方法并研究其生物分布,满足临床PET的用药需要.方法 以11C-CO2为原料,与CH3 MgBr反应后再用17%的H3PO4酸解,产物通过加热的方法蒸出,同时通过控制11C-CO2的释放速度和适当延长11C-CO2与CH3MgBr的反应时间,提高反应产率.小鼠给药后不同时间处死,分别取不同器官称重并测放射线计数.结果 从加速器生产出11C-CO2到产物11C-乙酸的蒸出完毕,需15 min,放化纯度大于98%,化学纯度大于99%,平均产率为34.6%(未经衰变校正).注射11C-乙酸后,放射线主要集中在肝脏及肾脏.结论 改进反应条件后的合成方法具有快速、高效的特点,为PET日常耗材节省了成本,提高了用药的质量.
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CO2激光治疗扁平疣25例
资料与方法1.临床资料扁平疣患者25例,女性4例,男性21例;年龄18～40岁.病程0～3年.病变部位:面部眼睑、两颊及颈部13例,双手背部及前臂8例,面部、颈部、双手背及前胸部均有分布4例.病程越长,赘生物分布越广泛.赘生物为扁平丘疹,其数量几个到数十个,颜面部及双手背赘生物大径3 mm左右;颈部及前胸部的赘生物较小,一般大径0.5～1.0mm.
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99mTc-Annexin B1的制备及其探测细胞凋亡的实验研究
目的 制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价.方法 应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1.采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性.在正常小鼠体内进行生物分布研究.采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti-Fas单抗诱导小鼠肝脏凋亡的动物模型检测99mTc-Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力,并用TUNEL染色证实细胞凋亡.结果 直接标记法制备的99mTc-Annexin B1具有很高的放射化学纯度和很好体外稳定性.与活化人血小板的结合实验表明,99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性.99mTc-Annexin B1在体内具有较快的清除特性,主要聚集于肾脏.地塞米松诱导18 h后,小鼠胸腺对99mTc-Annexin B1的摄取显著高于对照小鼠胸腺的摄取.Anti-Fas诱导后2 h时后,小鼠肝脏对99mTc-AnnexinB1的摄取显著高于为对照动物的肝脏摄取.结论 99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力,是一种新的细胞凋亡显像剂.
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99Tcm-ZPPAb在荷H22肝癌小鼠体内的生物学分布特性及显像特征
目的 探讨99Tcm-ZPPAb在荷瘤鼠体内生物学分布特征及显像特征.方法 ①建立荷H22肝癌小鼠模型48只,分为实验组及对照组,各24只.制备99Tcm-ZPPAb及99Tcm-IgG.②体内分布实验:取实验组与对照组各21只小鼠,分别经尾静脉注射99Tcm-ZPPAb和99Tcm-IgG 7.4 MBq,于30 min、1、2、3、4、5、6h,每时相取3只,计算各脏器每克组织的放射性摄取比率(％ID/g值)及肿瘤与对侧肌肉组织的放射性计数比值(T/NT值).③显像实验:取实验组与对照组各3只小鼠,分别经尾静脉注射99Tcm-ZPPAb和99 Tcm-IgG 7.4MBq,于30 min、1、2、3、4、5、6h计算T/NT值.结果 99Tcm-ZPPAb标记率为70％,99Tcm-IgG标记率为85％.体内分布实验结果显示,实验组荷瘤小鼠体内肿瘤组织不同时相间％ID/g值差异无统计学意义(F=0.89,P=0.5231),各时相肿瘤组织％ID/g值均高于除肝脏、肾脏和血液以外的其他组织器官(F=9.36,P=0.0007).两组间同时相肿瘤组织％ID/g值差异有统计学意义(F=13.49,P=0.0001).实验组不同时相T/NT值差异无统计学意义(F=1.53,P=0.2237);两组间同时相T/NT值差异有统计学意义(F=23.69,P=0.0001).显像实验结果显示,实验组不同时相T/NT值差异无统计学意义(F=1.00,P=0.4526),两组间同时相T/NT值差异有统计学意义(F=6.09,P=0.0048).结论 99Tcm-ZPPAb标记简单,标记率较高,在肿瘤组织中有较高的摄取与滞留,有望成为肿瘤阳性显像剂.
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99Tcm-octreotide在荷H22肝癌小鼠体内分布和显像研究
目的探讨99Tcm-octreotide作为生长抑素受体阳性肿瘤显像剂的可能性.方法99Tcm-octreotide的制备采用直接标记奥曲肽冻干品药盒的方法.①体内分布实验:25只正常KM小鼠和15只荷H22肝癌小鼠,静脉注射显像剂0.1ml(3.7 MBq)后行常规体内分布实验,计算%ID/g及肿瘤的T/NT值.②荷瘤鼠显像:5只荷瘤鼠于注入显像剂后1、2、3、4、6 h和24 h不同时相分别显像并计算T/B值.结果①体内分布:正常小鼠体内分布显示,血液在0.5 h放射性高[(3.20±0.54)%ID/g],随后迅速清除.双肾1 h摄取达高[(13.62±4.83)%ID/g],提示显像剂主要经泌尿系统排泄.99Tcm-octreotide在荷瘤鼠的体内分布与正常小鼠一致,肿瘤与其他脏器组织的T/NT较高.②受体显像:注射显像剂1 h后,小鼠全身轮廓清晰,肾和膀胱高度摄取显像剂,荷瘤鼠的已知肿瘤部位呈阳性显像.在2 h肿瘤部位的放射性浓聚高,显像效果佳.随后放射性逐渐减弱,但肿瘤影像仍较清晰.24 h时图像模糊.注射显像剂后1、2、3、4、6 h和24 h的T/B值分别为2.64、4.46、7.25、5.40、5.49和6.48,2 h以后各时相与1 h相比有显著性差异(P＜0.05),但3 h以后与前一时间点比较差异均无显著性(P＞0.05).结论一步法药盒制备的99Tcm-octreotide,在小鼠H22肝癌组织中分布快,消除较慢,靶和本底比值较高,注射后2h肿瘤显像佳.99Tcm-octreotide是一种很有前景的生长抑素受体显像剂.
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荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像的实验研究
目的研究细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的制备及其在荷瘤小鼠体内的生物分布特性和活体显像.方法采用双功能螯合剂HYNIC法锝[99Tcm]标记Annexin Ⅴ,经高效液相色谱仪分离纯化并检测标记产物.建立荷肿瘤小鼠模型,在20～25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下接种S-180肉瘤,生长1周.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗72 h后,尾静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ,分别于5 min、30 min、1 h、3 h、6 h后进行SPECT显像和体内生物分布测定.实验结果应用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析.结果 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的标记率达到95%,放射性化学纯度为99%.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h显像可见:注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ后6 h肿瘤组织呈明显异常放射性浓聚灶.体内生物分布实验观察到,注射显像剂后6 h肿瘤组织的放射性摄取值(1.59±0.44)高,与其他时相的肿瘤组织放射性摄取值比较P<0.05. 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ主要聚集在肾脏、肺脏和肝脏等,从肾脏排泄,其血流清除速度快,在注射后30 min,血液放射性摄取值(1.59±0.50)仅为5 min时(8.85±2.65)的20%(P<0.05).注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液放射性摄取率比值(2.80±0.54).结论 99Tcm-HYNIC-Annexin V有望成为一种富有应用前景的活体细胞凋亡分子探针.
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单次化疗后荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像研究
目的探讨活体肿瘤细胞凋亡监测作为评价肿瘤对化疗反应的一种新方法的可行性.方法细胞凋亡分子探针99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ经化学和放射化学合成获得.20～25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下组织接种S-180肉瘤,建立荷肿瘤小鼠模型.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗8 h、24 h、48 h、72 h后,分别尾静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ,1 h后进行单光子发射型计算机断层显像(SPECT)和体内生物分布测定,并与对照组进行比较.根据化疗后显像的佳时间,给荷瘤小鼠尾静脉注射99Tcm-DTPA-HSA,测定体内各组织器官的血流分布情况.所有体内生物分布的实验结果应用SPSS 10.0统计学软件进行统计学分析.结果荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h进行SPECT显像时,肿瘤的显像效果明显,且体内生物分布测定显示在化疗后72 h的肿瘤组织的放射性摄取值(1.87±0.58)高,是对照组(1.18±0.128)的1.58倍(二者比较,P<0.05),与显像结果具有一致性.肿瘤/肌肉(T/M)放射性摄取率之比为5.83±0.799,肿瘤/血液(T/B)为1.03±0.258,与对照组比较均为P<0.05.化疗组和对照组的肿瘤组织对99Tcm-DTPA-HSA的摄取无明显差异(P>0.05).结论在进行单次环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h,荷瘤小鼠的肿瘤组织对 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的摄取显著增加,细胞凋亡体内显像作为一种评价肿瘤对化疗反应的无创性的监测方法是有效、可行的.
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188Re直接法标记CD45单抗及其体内生物分布研究
目的：利用188Re直接法标记CD45单抗，探讨其在正常小鼠体内的生物学分布特性。方法应用2-巯基乙醇（2-ME）还原CD45单抗分子中的二硫键形成巯基；以氯化亚锡作为188Re的还原剂，葡庚糖酸钠为中间弱配体，188Re直接标记CD45单抗；PD-10层析柱分离纯化，纸层析法测定标记率与放化纯；鉴定188Re-CD45单抗的体外稳定性；研究188Re-CD45单抗在正常小鼠体内的生物分布特性。结果188Re-CD45单抗的标记率平均为（85.25±2.63）%，PD-10柱纯化后的放化纯为（92.54±3.56）%，比活度平均为（2.06±0.07）TBq/mmol；室温下放置24 h，188Re-CD45单抗放化纯为（64.33±1.53）%；在鼠血清和生理盐水中37℃下孵育24 h后，其放化纯仍有（64.2±3.77）%和（56.7±4.16）%。小鼠体内生物分布显示，188Re-CD45单抗主要分布于肾脏和肝脏，其次是肺脏、骨骼和血液。结论188Re直接法标记CD45单抗的方法简单易行，标记率较高，具有良好的体外稳定性；188Re-CD45单抗静脉注射后，体内放射性主要经肾脏排泄，并在肝脏有较高的浓聚，符合标记抗体的体内分布规律。
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PET-CT技术诊断骨质疏松症的实验研究
目的 应用正电子发射计算机体层摄影设备(PET-CT)对18F-NaF进行药代动力学研究,探讨18F-NaF对骨质疏松模型动物的摄取机理,为诊断骨质疏松症提供理论依据.方法 用切除卵巢法制作大鼠骨质疏松模型,对动物模型注射18F-NaF,利用PET-CT对各组大鼠进行全身显像,测定各骨骼对18F-NaF的摄取值.对比切卵巢实验组与对照组大鼠摄取18F-NaF的值,并进行统计学分析.结果 切卵巢实验组主要骨骼对18F-NaF的摄取值低于对照组,两组数据差异有统计学意义.结论 18F-NaF是理想的骨血流和代谢显像剂,以18F-NaF作为显像剂的PET-CT技术对诊断骨质疏松症具有较高的诊断价值.
关键词： 18F-NaF 生物分布 正电子发射计算机体层摄影-CT 骨质疏松症 动物模型 -
HER-2受体放射性配体99Tcm-TP1623的制备及其在正常动物体内的分布
目的 探讨HER-2受体放射性配体99Tcm-B2-S22-AFA(99Tcm-TP1623)在健康小鼠体内的生物分布和健康家兔体内的动态显像分布.方法 采用氯化亚锡间接法9 9Tcm标记TP1623,3MM色谱纸层析测定9 9Tcm-TP1623标记率,计算其比活度;通过体外稳定性实验、血清蛋白结合实验和油/水分配实验,鉴定标记产品理化性质;研究99Tcm-TP1623于1、5、10、30、60和120 min在健康小鼠体内的生物分布特性;通过SPECT显像,结合感兴趣区(ROI)时间-放射性曲线分析,观察99Tcm-TP1623在健康家兔体内的动态分布变化.结果 99Tcm-TP1623标记率为(96.4±0.1)％,比活度为(24.35±0.06) TBq/mmol,室温下放置6h后放化纯度为(95.03±0.97)％.油/水分配系数P为-(2.51±0.15).小鼠血液放射性清除快,通过肾脏排泄较快,心、肺、肝、肌肉、骨骼等放射性随时间延长逐渐减低,60 min后放射性呈明显低水平,肠道放射性则随时间缓慢增加.脑放射性始终呈低水平.健康家兔体内99Tcm-TP1623血池影消退迅速,主要通过肾脏排泄,见胆囊、肠道排泄影,胃区和颈部未见放射性浓聚,脑组织始终呈低本底.结论 99Tcm-TP1623制备方法简便,标记率及产品比活度高,体内、外稳定性好,具有优良的动物体内动力学特性.
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γ计数仪测定99mTc-3PRGD2在肺癌肿瘤模型小鼠中的组织分布
目的 建立一种由γ计数仪测定放射性肿瘤显像剂锝[99mTc]标记的联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体(99mTc-3PRGD2)的方法,并研究肺癌肿瘤模型小鼠注射该显像剂后体内组织分布特点.方法 设置4个正常分布组和1个冷肽封闭组(对照组),均经由尾静脉注射该显像剂(8μg/kg)于肺癌肿瘤模型小鼠,正常分布组分别于0.5、1、2和4 h取其组织,对照组在注射放射性药物前0.5 h,腹腔注射0.2 ml 3PRGD2生理盐水溶液(浓度2.5 mg/ml),并于2 h取其组织,肿瘤及其他组织使用γ计数仪检测其放射强度.结果 模型小鼠的肿瘤中放射性药物含量很高,脑组织药物透过量极少;肾和膀胱放射性都很高,提示该药物可能主要经肾排泄;对照组小鼠除肾和膀胱外,其他组织的放射性均很低.结论 该显像剂具有肿瘤靶向性;冷肽可竞争性地抑制99mTc-3PRGD2与整合素αvβ3受体结合.
关键词： 99mTc-3PRGD2 生物分布 肿瘤靶向 肺癌 -
99Tcm-小分子多肽配合物显像剂的合成及其在小鼠体内的生物分布研究
目的寻求新的心、肾显像剂.方法与结果以巯基乙酸为初始原料,用不同的羧基活化的方法设计合成了5个新的目标配体,其结构经光谱鉴定(IR,1HNMR,13CNMR,MS和元素分析).将合成的5个新目标配体进行了锝-99m放射性标记,研究了其在小鼠体内的生物分布特征.结论 99Tcm-MVG2有较高的肾摄取,较长时间的肾滞留,血清除快,且肾与其他组织的活度比值高,具备成为肾功能显像剂的条件;99Tcm-MVGT,99Tcm-MVGH和99Tcm-MPGT均有较高的心肌初始摄取,但心肌滞留不好,血清除慢,心肌与其他组织的活度比值不高,主要从肝、肾中代谢.
关键词： 多肽 心、肾显像剂 锝-99m放射性标记 生物分布 -
新N3S型类肽配体的合成及其小鼠体内的生物分布研究
目的探索新的含多肽心、肾显像剂的合成方法.方法和结果以巯基乙酸为初始原料,通过5步反应设计合成了5个新的N3S型类肽配体,其结构经谱学鉴定(IR,1HNMR,MS和元素分析);并进行了锝-99m放射性标记,研究了其在小鼠体内的生物分布特征.巯基的保护方法得到了较好的改善,提出了较新颖的活泼酯与氨基酸偶联的实验条件.结论小鼠体内的活性实验结果表明,99Tcm-MPNM,99Tcm-MPNE和99Tcm-MVNM有较高的心肌初始摄取和较快的血清除速度,99Tcm-MPG2有较好的肾初始摄取和肾/血活度比值(约为4).
关键词： 多肽 心肾显像剂 锝-99m放射性标记 生物分布 -
3H-去甲斑蝥素小鼠体内药代动力学与组织分布
健康小鼠灌服3H-去甲斑蝥素溶液,收集不同时间血、组织、尿和粪,采用氚标记示踪法测定放射活性,计算3H-去甲斑蝥素血浓度、单位组织放射活性及尿和粪累积排泄率,DAS软件拟合小鼠去甲斑蝥素药代动力学模型,计算其药代动力学参数,评价3H-去甲斑蝥素小鼠体内的吸收、分布及排泄过程.结果表明,小鼠灌服3H-去甲斑蝥素0.5 h后血中放射活性达峰值;15 min后小肠、胆囊、胃、肾上腺、肾脏、心脏、子宫等放射活性较高,此后逐渐降低,但3 h后胆囊、肾上腺、子宫放射活性仍较高,肾脏、肝脏等组织则较低;24 h后粪便和尿液累积排泄率分别为65.40%和1.33%.因此,小鼠口服3H-去甲斑蝥素吸收迅速,血中分布明显高于其他组织;胆囊、肾上腺、子宫分布多且持久,肝脏分布少且消除快,肾脏则分布多,但消除也快.3H-去甲斑蝥素主要经肾脏排泄,极少量经粪便排泄.由于所测放射活性为去甲斑蝥素原形及代谢物之和,应对其体内转化过程及可能代谢产物做进一步研究.
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实时定量PCR技术研究DNA疫苗在小鼠体内的生物分布
目的:建立并确证实时定量PCR(RT-PCR)定量检测生物基质中质粒DNA的方法,并应用于治疗性核酸疫苗HIV-PV的体内生物分布研究.方法:建立SYBR Green荧光定量PCR绝对定量方法(Q-PCR),考察方法的特异性、灵敏度、精密度、准确度以及生物基质对PCR的抑制效应.小鼠尾静脉注射裸质粒DNA、小鼠尾静脉注射和灌胃2种途径免疫HIV-PV DNA疫苗,考察建立的Q-PCR方法对于不同形式的质粒DNA疫苗以及不同免疫方式的适用性.结果:Q-PCR方法可特异检测目标DNA,定量检测范围为10～107拷贝/100 ng基因组DNA(gDNA),定量下限(LLOQ)为10拷贝/100 ng gDNA.批内和批间精密度分别<11%和8%;由高至低4种浓度(107,104,100,10拷贝/100 ng gDNA)QC样品准确度分别为(1.57±0.02)%,(1.60±0.01)%,(2.20±0.02)%和(2.28±0.02)%.用Q-PCR方法成功得到不同形式DNA疫苗和不同免疫途径(尾静脉注射和灌胃HIV-PV疫苗)下该质粒DNA的生物分布模式.结论:利用RT-PCR技术,建立了符合DNA疫苗生物分布研究要求的定量检测生物基质中质粒DNA的方法学,并成功应用于不同质粒DNA疫苗形式和不同免疫途径下的DNA疫苗的生物分布研究.
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腺病毒载体HIV疫苗在C57BL/6小鼠体内的生物分布评价
目的:建立腺病毒载体HIV疫苗检测的实时荧光定量PCR方法,并评价疫苗在C57 BL/6小鼠体内的生物分布.方法:以gag基因片段为检测对象,建立绝对定量PCR方法.C57BL/6小鼠单次肌内注射5×109 vp HIV疫苗,给药后d3,15,30,60,85收集组织脏器,用建立的荧光定量PCR方法定量检测HIV疫苗.结果:检测方法线性范围为1×102～1×107 copies·μL-1,特异性强,重复性较好.HIV疫苗主要分布在注射位点,淋巴结、脾脏和肝脏也有少量分布；疫苗的量随时间延长逐渐减少.结论:肌内注射HIV疫苗后导致广泛的分布,分布的量呈时间依赖性减少,没有生殖细胞转移的危险,HIV疫苗在小鼠体内是安全的.
