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荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像的实验研究
目的研究细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的制备及其在荷瘤小鼠体内的生物分布特性和活体显像.方法采用双功能螯合剂HYNIC法锝[99Tcm]标记Annexin Ⅴ,经高效液相色谱仪分离纯化并检测标记产物.建立荷肿瘤小鼠模型,在20～25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下接种S-180肉瘤,生长1周.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗72 h后,尾静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ,分别于5 min、30 min、1 h、3 h、6 h后进行SPECT显像和体内生物分布测定.实验结果应用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析.结果 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的标记率达到95%,放射性化学纯度为99%.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h显像可见:注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ后6 h肿瘤组织呈明显异常放射性浓聚灶.体内生物分布实验观察到,注射显像剂后6 h肿瘤组织的放射性摄取值(1.59±0.44)高,与其他时相的肿瘤组织放射性摄取值比较P<0.05. 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ主要聚集在肾脏、肺脏和肝脏等,从肾脏排泄,其血流清除速度快,在注射后30 min,血液放射性摄取值(1.59±0.50)仅为5 min时(8.85±2.65)的20%(P<0.05).注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液放射性摄取率比值(2.80±0.54).结论 99Tcm-HYNIC-Annexin V有望成为一种富有应用前景的活体细胞凋亡分子探针.
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活体细胞凋亡检测筛选肝癌敏感化疗药物的实验研究
目的:通过动物实验探讨99Tcm-HYNIC Annexin Ⅴ活体细胞凋亡检测筛选肝癌敏感化疗药物的可行性.方法:20只VX-2荷瘤免随机分为4组,通过治疗剂量的紫杉醇(PAC,n=6),5-氟尿嘧啶(5-FU,n=5),表柔比星(EPI,n=5)分组干预治疗,同时建立对照组(C,n=4).分别予化疗前2h、化疗后46 h静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin V,2h后再以单光子发射计算体层摄影(SPECT)成像,选取肿瘤部位放射性计数(T)及腿部非肿瘤区部位放射性计数(NT),计算其比值(T/NT),进行半定量分析,确定敏感化疗药物.取肿瘤组织,分别予免疫组化(Tunel)和流式细胞仪(FCM)分析组织细胞凋亡率,放射性核素聚集显像与肿瘤细胞凋亡进行相关性分析.实验数据以SPSS 17.0软件分析.结果:99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ放射显像显示,化疗前各组肿瘤部位均无明显显像(F=0.025,P=0.980),放射性核素分布主要聚集在肾脏及膀胱区.药物干预48 h后,对照组仍无显像,而药物干预组显像清楚,放射性计数显著高于对照组(F=16.52,P＜0.001)及化疗前(P＜0.01).药物干预组中,PAC组肿瘤组织放射性显像显著高于5-FU组和EPI组(P值分别为0.042和0.003),而5-FU组与EPI组间放射性显像差异无统计学意义(P=0.224).99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ活体细胞凋亡检测结果与免疫组化及流式细胞检测结果一致(R2=0.537 7,P=0.002;R2=0.695 4,P＜0.001).结论:99Tcm-HYNIC-Annexin V核素显像检测能够反映活体组织细胞凋亡情况,该方法能够在活体状态下筛选敏感化疗药物.
