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激素难治性前列腺癌细胞对化疗药物敏感性的比较
为临床选择激素难治性前列腺癌(HRPC)的化疗方案提供参考, 采用3H-胸苷酸(3H-TdR)掺入法检测了20例HRPC细胞对常用化疗药物的敏感性.HRPC对单药的敏感性依次为足叶乙甙＞阿霉素、5-氟尿嘧啶、雌二醇氮芥＞长春花碱＞顺铂; 两药联合可使敏感性进一步提高, 依次为雌二醇氮芥+足叶乙甙、5-氟尿嘧啶+阿霉素＞雌二醇氮芥+长春花碱＞5-氟尿嘧啶+顺铂;三药联用抑瘤作用更强, 雌二醇氮芥+长春花碱+阿霉素、5-氟尿嘧啶+阿霉素+顺铂＞雌二醇氮芥+长春花碱+顺铂.对HRPC以联合化疗效果较好, 3H-TdR掺入法体外检测化疗药物的敏感性有助于化疗方案的选择.
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肺癌体外药敏试验与临床疗效的关系
目的 采用噻唑蓝(MTT)体外药敏试验筛选治疗肺癌的敏感药物并指导临床化疗。方法 收集2008年1月至2009年12月本院呼吸内科住院治疗的肺癌患者100例，按随机数字表法分为试验组和对照组，每组50例。试验组进行MTT体外药敏试验，根据药敏结果指导化疗；试验组中药敏试验耐药者及对照组按经验方案用药化疗。观察临床化疗的疗效，并评价其与体外药敏试验的关系。结果体外药敏试验与临床疗效的总符合率为80.0％(32/40)，阳性符合率为81.3％(26/32)，阴性符合率为75.0％(6/8)。体外药敏试验的敏感性为92.9％( 26/28),特异性为50.0％(6/12)。体外药敏试验敏感者在药敏试验指导下治疗有效率为81.3％(26/32),经验方案用药化疗的对照组治疗有效率为60.0％( 30/50)，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 体外药敏试验与临床化疗疗效一致性较好。根据体外药敏试验结果指导肺癌患者临床化疗，有助于提高临床疗效。
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利用卵巢癌干细胞特异性基因表达谱进行针对性药物初步筛选
目的 综合分析卵巢癌中各干细胞特异性基因表达谱,发现其共同的表达特征,以期筛选具有逆转肿瘤细胞干细胞特性的小分子化合物.方法 从NCBI GEO数据库中获取卵巢癌细胞系、患者来源的卵巢癌干细胞与各非干性卵巢癌细胞的全基因组表达谱,进行整合比对分析,并以8例进展期卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞的差异基因表达谱为校正,获得差异表达基因.利用GeneSifter软件解析卵巢癌细胞的干性特征并建立分子标签,使用连通图法筛选具有逆转此类分子标签的小分子化合物.结果 进展期卵巢癌患者来源的卵巢癌细胞相比正常人卵巢上皮细胞、卵巢癌细胞系OVCAR-3来源的多细胞球相比OVCAR-3细胞、卵巢癌细胞系IGROV1来源的侧群细胞相比非侧群细胞、进展期卵巢癌患者腹水细胞来源的侧群细胞相比腹水总体细胞差异表达的基因数分别为6053、6495、1347、509个,均满足差异基因表达在1.5倍以上且t检验P值＜0.05.其中NGFI-A结合蛋白1(NAB1)等为共同上调的关键基因,S蛋白1(PROS1)、雌激素介导的乳腺癌生长调节因子1(GREB1)、Kruppel相似因子9(KLF9)和线粒体肿瘤抑制因子1(MTUS1)等为共同下调基因.筛选出SC-560、disulfiram、thapsigargin、esculetin、cinchonine等18种小分子化合物具有逆转卵巢癌细胞干性的潜在药理特性.结论 初步揭示了各卵巢癌细胞中共有的干性差异表达基因及其特异调控网络,为筛选卵巢癌干细胞靶向药物提供了依据.
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以PLK1 PBD为靶点的小分子抑制剂筛选及其抗癌活性研究
目的利用荧光偏振模型进行 PLK1 PBD 抑制剂的高通量筛选，并对阳性化合6143D7的抗癌效果进行体外评价。
方法采用噻唑蓝比色法检测初筛阳性化合物对不同细胞系增殖的影响；流式细胞术检测化合物对细胞周期以及凋亡率的影响；分子对接检测化合物与 PLK1 PBD 结构域的亲和性。
结果利用荧光偏振模型得到的阳性化合物6143D7经噻唑蓝比色法检测显示能抑制癌细胞的增殖；流式细胞仪检测显示该化合物加药组 G2/M 期细胞比例高于对照组并能促进细胞凋亡；分子对接结果表明化合物与 PLK1 PBD 结构域的亲和性良好。
结论该化合物通过抑制 PLK1 PBD 结构域的活性发挥抗癌作用，有望成为靶向 PLK1的抗肿瘤先导化合物。关键词： 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 药物筛选试验 抗肿瘤 荧光偏振 polo样激酶1抑制剂 -
ZD6474衍生物筛选和抗肿瘤活性研究
目的 对自主研发的ZD6474衍生物进行抗肿瘤活性研究,从而为进一步的结构修饰、改造与药理学研究奠定良好的基础.方法 采用均相时间分辨荧光法以VEGFR-2、EGFR为检测靶点评价化合物的抑制活性；采用SRB法检测化合物对细胞的增殖抑制活性；移植人非小细胞肺癌H1299裸鼠模型作为体内抗肿瘤活性评价.结果 从大量化合物中筛选出4个有较好酪氨酸激酶抑制活性的化合物,分别编号为106、113、115、116.体外细胞实验结果显示化合物对肿瘤细胞生长增殖均有抑制作用,其中106对A431、H1975和A549细胞系均表现出良好的抑制活性.体内试验结果表明,106能够剂量依赖性抑制裸鼠肿瘤生长,且作用与ZD6474相当,25、75 mg/kg的106和ZD6474对H1299的相对肿瘤增殖率为57.3％、38.8％和52.5％、29.6％.结论 化合物106具有良好的体内外抗肿瘤作用,有进一步的研究价值.
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表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌细胞Eca-109的作用研究
目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌 Eca-109的作用。方法采用 MTT法检测化合物对肿瘤细胞增殖的影响；采用克隆形成法检测 EGCG对肿瘤细胞克隆形成的影响；采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞凋亡的影响；采用动物实验评价药物或 EGCG对移植于裸鼠的移植瘤的生长抑制作用；同时采用免疫组化的方法检测药物或 EGCG对血管形成的影响。结果 EGCG能够剂量依赖性地抑制 Eca-109细胞增殖，其 IC50值为43.22μmol/L。经克隆形成法检测结果表明， EGCG能够明显抑制 Eca-109细胞的克隆形成，IC50值为28.49μmol/L。EGCG能够显著引起 Eca-109细胞凋亡，60和80μmol/L EGCG诱导的凋亡百分率分别为（21.70±0.62）%、（57.13±9.09）%。EGCG和西妥昔单抗联用对 Eca-109细胞的增殖抑制作用较单独用药组强，具有相加作用。体内实验结果表明， EGCG 和西妥昔单抗均能抑制 Eca-109裸鼠移植瘤的生长，两者联用存在增强作用。EGCG和西妥昔单抗均能抑制裸鼠移植瘤的血管形成，两者联用血管形成抑制作用较单用组更强。结论 EGCG能够抑制食管癌 Eca-109的细胞增殖和克隆形成，具有诱导 Eca-109细胞凋亡作用，与西妥昔单抗联用在体内外均具有增强作用。
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转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长和化疗敏感性的影响
目的研究转染survivin 反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长的影响以及转染后淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性.方法构建survivin 反义mRNA真核表达质粒pcDNA3.1-反义(As)survivin;利用脂质体转染法将其转入高表达survivin mRNA T淋巴母细胞淋巴瘤Jurkat细胞系,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学SP法、Western印迹法检测细胞中survivin表达;用细胞计数、流式细胞术(FCM)检测其细胞生长曲线、细胞凋亡指数,并进行光镜、电镜形态学观察;并对转染pcDNA3.1-Assurvivin前后Jurkat细胞分别加入4-羟基-环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)72 h后,常规MTT检测细胞存活率.结果 RT-PCR检测转染pcDNA3.1-Assurvivin后48 h、5和6周Jurkat细胞survivin mRNA表达,发现survivin mRNA表达皆低于对照组;转染后survivin蛋白表达也明显降低.转染pcDNA3.1-Assurvivin后Jurkat细胞生长倍增时间(52 h)明显延长;用FCM检测细胞凋亡发现,转染pcDNA3.1-Assurvivin后Jurkat细胞凋亡指数[20.2%(48 h)]明显高于对照组(转染空质粒和未转染组,2.1%和1.3%);5和6周为6.2%和6.8%,明显高于未转染细胞(1.3%和1.0%).光镜、电镜观察见转染细胞出现较多凋亡细胞及一些变性肿胀细胞;MTT检测结果显示Jurkat细胞转染前后,经化疗药物4-羟基-环磷酰胺和甲氨蝶呤作用,转染细胞的抑制率明显大于未转染组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 survivin基因对Jurkat细胞系的生长起着重要的作用,抑制survivin 基因表达在T淋巴母细胞淋巴瘤治疗中可能有重要的意义,该基因似可能作为治疗的靶点.
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基于三级结构比对和网络分析对抗乙肝病毒药物的筛选
目的 运用蛋白区块结构码技术和药物靶点网络对抗乙肝病毒药物进行筛选.方法 采用拉米夫定作用的靶点区结构扫描晶体结构一维码数据库以期发现和拉米夫定靶点结构相似的潜在靶标.基于Drugbank数据库建立乙肝病毒相关药物靶点网络,并针对靶点结构比对结果建立相应的乙肝病毒相关药物靶点子网络.对所预测的子网络中药物同药物靶点网络中的药物进行比较分析.结果 预测结果显示,14个靶蛋白结构和拉米夫定作用靶点结构相似.所预测的子网络中的13种药物位于已知的药物靶点网络中.已上市药物中更昔洛韦和阿昔洛韦可能对乙肝病毒有较强抑制作用.结论 本研究从结构生物学和药物靶点网络角度筛选新的乙肝病毒抑制剂,进而为临床新药的开发提供有益的线索.
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不同预处理方法对β-内酰胺类抗生素皮试结果及安全性的影响
目的：研究对β-内酰胺类抗生素采用不消毒直接进行皮试方法的优越性及安全可行性。方法采用大样本量的前瞻性随机对照研究方法,选择某三级甲等医院需要进行β-内酰胺类抗生素皮试的成年住院患者25153例,按随机数字表法随机分为3组,直接注射组8371例无预处理直接进行皮试,乙醇组8356例采取75%乙醇消毒后皮试,0.9%氯化钠溶液组8426例采用0.9%氯化钠溶液擦拭后皮试。比较3组预处理方法对皮试的结果以及皮试相关性感染情况。结果皮肤试验阳性乙醇组、0.9%氯化钠溶液组、直接注射3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。皮肤试验假阳性乙醇组、0.9%氯化钠溶液组、直接注射3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。皮试后72 h观察,3组均未发生注射处皮肤感染及潜在全身感染。结论对β-内酰胺类抗生素采用不消毒直接进行皮试的方法是安全可行的,值得临床推广使用。
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下调DNA拓扑异构酶Ⅰ基因提高小细胞肺癌细胞株对足叶乙甙的敏感性
目的 检测DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopⅠ)在小细胞肺癌细胞株中的表达与TopⅡ抑制剂(足叶乙甙)敏感性的关系,为临床个体化治疗提供依据.方法 Western-blot检测TopⅠ在小细胞肺癌细胞株H446蛋白水平的表达;应用人工合成并荧光标记的siRNA通过脂质体瞬时转染H446细胞,流式细胞仪检测转染效率,分别应用定量RT-PCR及Western-blot检测各干扰序列在mRNA及蛋白水平的干扰效果,筛选佳干扰序列;并对转染后的细胞株进行足叶乙甙(VP16)药物敏感性试验,观察TopⅠ的表达水平与VP16敏感性的关系.结果 TopⅠ基因在H446中有较高表达.siRNA干扰效果满意,流式细胞仪显示转染效率可达86.67%左右,RT-PCR显示干扰序列在mRNA水平干扰效率可达(96.33±1.87)%,Western-blot显示在蛋白水平也有明显的干扰效果.MTT结果 显示,相同浓度的VP16对TopⅠ下调后H446细胞的抑制率明显高于转染前的H446细胞(P<0.01),IC50值分别为66.94 μmol/L(1.97×PPC)及338.79 μmol/L(9.97×PPC).结论 脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TopⅠ表达;TopⅠ表达下调明显提高了对VP16的敏感性,为临床个体化治疗提供实验依据.
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药物诱导细胞凋亡与胃癌治疗
1细胞凋亡与胃肿瘤治疗细胞凋亡(apoptosis)是细胞发育代谢,维持正常功能过程中的一种生理现象,是细胞衰老、死亡的主要形式之一.它与病理情况下的细胞坏死不同,典型的细胞凋亡形态学改变是:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成.胃细胞学检查证明,正常的胃粘膜存在细胞凋亡,从腺体的底部到表面,都能看到少量的凋亡小体.细胞分裂的周期中决定细胞生长速度和凋亡的关键是G1期[1].近年来,发现胃癌中不仅存在细胞过度增生,同时存在细胞的凋亡异常[2],细胞凋亡异常在肿瘤发生发展过程中具有重要的病理生理意义[2,3].
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fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应
目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.
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MGr1抗体筛选文库获得胃癌耐药相关的新基因片段
目的制备胃癌多药耐药相关性单克隆抗体(mAb),并以该抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库,以获得肿瘤耐药相关的新基因片段.方法采用杂交瘤技术,以胃癌耐药细胞株SGC7901/ VCR为免疫原制备胃癌多药耐药相关性,mAbMGr1,并以MGr1作为探针对肿瘤耐药细胞表位文库反复进行筛选;对稳定阳性重组子所携带的cDNA片段进行正反向测序,并将测序结果输入GeneBank进行同源性分析;原位杂交与Northern blot检测阳性克隆在不同组织细胞中的表达.结果经过21次融合获得了26株培养上清能与SGC7901/ VCR结合的杂交瘤克隆,经免疫组化和单克隆抗体逆转耐药实验发现其中一株mAb在SGC7901/ VCR膜表面及胞内的表达显著高于其相应的药物敏感细胞SGC7901,并能部分逆转SGC7901/ VCR对ADR和5-FU的耐药性. Western blot表明该mAb对应的抗原Mr 800 000～110 000,与Pgp和MRP不同,该株mAb被命名为MGr1. 以MGr1筛选文库,获得了5个能与MGr1抗体结合的携带阳性重组子的菌落,经反复筛选后,证实有一个稳定的阳性克隆;正反向测序结果表明该阳性cDNA片段长度为310 bp,GeneBank检索显示该片段无任何同源性;原位杂交表明该基因在肝、食管、胃、大肠的正常组织均未见表达,Northern blot证实该基因在胃癌细胞SGC7901,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR,食管癌细胞EC109,肝癌细胞HCC7402中均有表达,但在SGC7901/ VCR中的表达量显著高于其他细胞.结论成功地制备了胃癌耐药相关性mAbMGr1. 以MGr1抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库获得了一个与胃癌耐药相关的新基因片段.
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以端粒酶为靶点的天然抗癌药物筛选策略
0 引言肿瘤是一系列基因异常累加的遗传性疾病.人类癌基因的激活是由于基因数量的增加或结构的变化所致[1].随着人类基因组草图的初步完成,接下来的工作重点必然是找出疾病相关基因及利用这些基因提供治疗疾病的新手段.
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胰腺癌多细胞团簇的化疗药物敏感试验
目的 探讨应用胰腺癌多细胞团簇做化疗药物敏感试验的可行性.方法 应用胶原凝胶微滴三维培养胰腺癌细胞株SW1990、PCT-3和ASPC-1细胞.在形成多细胞团簇后,采用CD-DST法和CCK-8法测定其对不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)、健择(GEM)及奥沙利铂(OXA)3种化疗药物的敏感性,并与分散细胞模型进行比较.结果 形成多细胞团簇的3种胰腺癌细胞对不同浓度5-FU、GEM及OXA三种药物的敏感性均较分散细胞的敏感性显著下降(P<0.05).50μg/ml 5-FU对SW1990、PCT-3、ASPC-1多细胞团簇的抑制率分别为(53.96±4.32)%、(58.49±5.98)%、(49.57±4.36)%;25 μg/ml GEM对SW1990、PCT-3、ASPC-1细胞团簇的抑制率为(53.02±4.06)%、(61.90±4.89)%、(38.09±4.88)%,10 μg/ml OXA对3种细胞团簇的抑制率为(57.33±6.27)%、(50.90±4.90)%、(47.26±4.29)%,均显著低于对分散细胞的抑制率(P<0.05).结论 肿瘤细胞形成细胞团簇后对抗肿瘤药物的敏感性明显降低,耐药性增加,更符合体内状态.
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肺癌组织p53基因突变与肿瘤耐药基因表达的相关性及其临床意义
目的探讨p53基因突变与肿瘤耐药基因表达状况及肺癌耐药的关系.方法应用免疫组织化学法检测66例肺癌及其癌旁组织的突变型P53蛋白及耐药相关蛋白的表达水平.其中31例肺癌及其癌旁组织应用聚合酶链测定-单链构象多态性(PCR-SSCP)-银染法及逆转录-聚合酶链测定(RT-PCR)法检测p53基因第5～8外显子突变情况及各种耐药基因的mRNA表达水平;12例应用三磷酸腺苷-肿瘤化疗敏感实验(ATP-TCA)检测肺癌细胞对诺维本、卡铂、依托泊苷、表柔比星、5-氟尿嘧啶、博莱霉素的敏感性.结果突变型P53蛋白与P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白 (MRP1)、谷胱甘肽-S-转移酶π (GST-π)的表达状况存在着相关性(r分别为:0.47、0.33、0.44,P均<0.05);ATP-TCA结果显示突变型P53蛋白的表达状况及其与Pgp、MRP的共表达均和诺维本及卡铂的耐药相关(P均<0.05).结论肺癌组织耐药相关蛋白的表达与p53基因突变有关,突变型P53蛋白的检出可以预示内源性耐药的存在,恢复野生型P53蛋白的功能可能有助于逆转耐药.
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三种HLA-A/0201限制性表位肽尤文肉瘤树突状细胞疫苗的抗肿瘤免疫作用
目的比较不同EWS/FLI-1蛋白HLA-A/0201限制性表位肽对尤文肉瘤树突状细胞(dendriticcell，DC)疫苗的抗肿瘤作用。方法综合运用BIMAS、SYFPEITHI软件筛选与人白细胞抗原HLA-A/0201结合力强的EWS/FLI-1蛋白9肽表位，并合成其表位肽。采用4 h标准51Cr释放实验检测刺激细胞毒性T淋巴细胞( cytotoxic T lymphocytes，CTLs )对肿瘤细胞的杀伤效应。应用酶联免疫斑点法( enzyme linked immunospot assay，ELISPOT )检测表位肽对DC疫苗刺激的效应细胞γ-干扰素( interferon，IFN-γ)的释放。在此基础上，进行免疫治疗的动物实验，比较其体内抗肿瘤作用。结果筛选出EWS306、EWS289及EWS 401与HLA-A/0201具较强的结合性，其合成出的表位肽分别为：QLWQFLLEL ( EWS 306)、ILGPTSSRL ( EWS 289)和SMYKYPSDI ( EWS 401)。3组表位肽均有较强的杀伤力，当效-靶比为50∶1时，杀伤率EWS 306组(20.2±1.8)%、EWS 289组(12.6±0.3)%、EWS 401组(11.9±0.2)%，而对照组为(6.7±0.1)%；当效-靶比为100∶1时，表位肽的三组杀伤作用明显提升，杀伤率EWS 306组高为(51.2±3.7)%、EWS 289组(24.6±2.1)%、EWS 401组(17.8±0.9)%，对照组为(7.2±0.2)%。EWS 306组同其它组比较，差异有统计学( P＜0.05)。EWS 306组分泌的IFN-γ为(118.3±3.6)个点明显高于EWS401组(35.1±1.0)个和EWS 289组(34.2±0.9)个，对照组为(5.0±0.1)个( P＜0.05)。EWS 306组肿瘤的体积(978.9±28.2) mm3明显小于阴性对照组(1992.9±16.1) mm3和空白对照组(2001.9±12.3) mm3( P＜0.05)。接种后第35天，EWS 306组存活率为80%大于空白对照组为0%、阴性对照组为10%( P＜0.05)；接种后第40天，空白对照组降为0%， EWS306组为80%明显大于和2个对照组(P＜0.05)。结论 EWS/FLI-1蛋白表位肽中EWS306较EWS289和EWS 401对DC的抗肿瘤作用更强，能够有效激活CTLs对肿瘤细胞的杀伤效应，为尤文肉瘤的免疫治疗提供了新的方向。
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一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立
目的 用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV-1药物筛选方法,并判断这种方法在筛选抗HIV-1药物中的应用前景.方法 把JLTRG细胞和H9/HTLV-ⅢB细胞按照不同比例共培养24,48,72和96 h.在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度,同时用流式细胞仪测定绿色荧光的表达,并确定培养体系中佳细胞比例和培养时间.通过选出的佳条件结合药物半衰期检测恩夫韦肽(T20)和依非韦伦(EFV)的有效性及药物半数抑制量(IC50).采用HIV-1 P24抗原荧光定量PCR法检测病毒载量,并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之间的相关性.结果 实验结果显示,JLTRG细胞与H9/HTLV-ⅢB细胞按照10∶1的细胞数量比例共培养72 h为佳培养比例和时间.以T20和EFV对共培养体系进行验证,结果显示随着T20和EFV浓度的改变,共培养体系中JLTRG细胞感染HIV-1的程度不同,其IC50分别为10 nmol/L和5 nmol/L.T20和EFV药物浓度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关(r=-1,-0.986和-1,-1,P＜0.01);平均荧光强度与病毒载量呈正相关(r=0.986和1,P＜0.01).结论 本研究建立的新型抗HIV-1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点,可为抗HIV-1药物的筛选提供新的选择.
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肾癌特异性配体多肽ZT-2筛选及新标志物的研究
目的 寻找肾癌早期诊断和靶向治疗的标志物. 方法 以肾癌细胞株A498为靶细胞,正常肾细胞株HK-2为吸附细胞,37℃下对噬菌体十二肽库进行4轮减性筛选.挑取单克隆采用ELISA方法 初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性.结果 经ELISA初步鉴定,随机挑选20个单克隆中,2号多肽对A498细胞亲和力高(A_(ZT-2)/A_(对照)比值为3.15),命名为Phage-ZT-2.细胞免疫荧光试验证明,合成的相应多肽FITC-ZT-2对A498细胞具有特异性结合.利用荧光标记的ZT-2检测肾癌组织芯片,肾癌组织ZT-2的荧光吸光度(A)值为0.453±0.123,正常组织及非肾癌炎性组织为0.148±0.075,2组间比较差异有统计学意义(t=2.776,P<0.01).结论 成功筛选出与肾癌细胞特异性结合的多肽ZT-2,为肾癌的早期诊断和靶向治疗提供了实验依据.
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去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖和凋亡的体内干预实验
目的探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖和凋亡的影响.方法建立裸鼠人胆囊癌种植瘤模型,实验分为对照组、5-FU组、NCTD组、NCTD+5-FU组4组.测定移植瘤大小、生长曲线和抑瘤率,应用流式细胞术、光学和电子显微镜观察移植瘤细胞的细胞周期、凋亡率和形态学改变.数据统计采用SPSS11.5软件包方差分析或x2检验.结果NCTD对荷瘤鼠的半数致死量(LD50)为139.96 mg·kg-1.应用1/5LD50即可使裸鼠移植瘤明显缩小(5.61±0.39 vs.9.78±0.61 cm3,P=0.000),抑瘤率增高(42.63%vs.0,P=0.012);移植瘤细胞周期中S期细胞明显减少(43.47%±2.83%vs.69.85%±1.96%,P=0.000),凋亡率上升(5.49%±0.59%vs.15.08%±1.49%,P=0.000);与5-FU合用时上述作用更明显(P=0.000).NCTD作用后的移植瘤细胞经光镜检查见胞核固缩,核碎裂等现象;电镜显示典型的凋亡细胞及凋亡小体.结论NCTD可明显抑制荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的增殖和生长,若与5-FU合用呈协同效应,可加强其抗癌作用.
