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重组趋化因子vMIP-Ⅱ在大肠杆菌中的表达和纯化
目的重组病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)在大肠杆菌中表达及纯化.方法以pET32a(+)-vMIP-Ⅱ为重组趋化因子vMIP-Ⅱ克隆基因的表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为表达菌,在IPTG诱导下表达出一个由230个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白(thioredoxin)-vMIP -Ⅱ的融合蛋白(26×103).经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离vMIP-Ⅱ及阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白,以配体结合实验鉴定纯化产物的生物学活性.结果从1 L 发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约4～6 mg.配体结合实验表明,该产物能与CCR5结合[Kd=(10.90±1.07) nmol/L].结论采用本方法可获得高表达、高纯度的具有生物学活性的重组病毒趋化因子vMIP-Ⅱ.
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广谱趋化因子受体结合物-vMIP-Ⅱ的体内抗SIV功能研究
病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)是一种广谱趋化因子受体拮抗剂,它所拮抗的趋化因子受体被认为是不同的人免疫缺陷病毒株(Human immunodeficiency virus,HIV)进入靶细胞的辅受体.虽然理论上vMIP-Ⅱ是一个广谱的HIV抑制剂,但vMIP-Ⅱ的抗HIV感染作用却少有报道,特别是体内研究.本研究利用一个有效的SIV-mac251感染食蟹猴模型来评价vMIP-Ⅱ的体内抗HIV感染作用,结果显示vMIP-Ⅱ能够有效地并呈剂量依赖性地降低食蟹猴血浆病毒载量,同时对宿主免疫功能具有保护作用.这些结果表明vMIP-Ⅱ是一种有效的抗HIV物质,可以作为一类新型的抗HIV先导药物,也为研发靶向病毒进入的新药提供了进一步的理论支持.
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vMIP-Ⅱ各受体结合活性位点分析
目的 探索vMIP-Ⅱ结合趋化因子受体的活性位点以便有目的地对其进行改构.方法 应用生物信息学方法对影响vMIP-Ⅱ受体结合的氨基酸残基进行预测分析.结果 vMIP-Ⅱ对不同的受体有不同结合位点,其与CC类趋化因子受体结合位点主要在核心骨架,与CXC类趋化因子受体结合位点主要在N端.结论 vMIP-Ⅱ是一种极佳的趋化因子受体阻断剂类新药开发先导物.
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vMIP-Ⅱ通过 CXCR4拮抗乳腺癌转移作用的初步研究
背景与目的: CXCR4-SDF-1α体系在乳腺癌靶向转移中具有重要作用,已证明多种 CXCR4拮抗剂对乳腺癌转移有抑制作用.本研究拟探讨作为 CXCR4封闭因子的病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ , vMIP-Ⅱ)对乳腺癌细胞株 MCF 7转移相关因素的影响.方法: MTT法检测不同浓度 vMIP-Ⅱ刺激下 MCF-7的增殖效应;软琼脂集落形成实验评价克隆形成率;粘附和趋化实验观察 vMIP-Ⅱ对不同转移阶段 MCF-7细胞的作用.结果:(1)系列浓度的 vMIP-Ⅱ处理细胞 72h后,细胞没有表现出增殖效应( P >0.05). (2)vMIP-Ⅱ以浓度依赖的方式抑制细胞集落的形成, 50、 100、 500和 1 000 ng /ml vMIP-Ⅱ作用后,细胞的琼脂集落抑制率在 18.2%～ 54.6%之间. (3)经 300 ng/ml 的 vMIP-Ⅱ处理不同时间( 0 min、 30 min、 2 h 和 6 h)后,细胞在 2 h对纤维连接素( FN)和 Matrigel的粘附都达到了抑制高峰. (4)在趋化实验中, 500 ng/ml vMIP-Ⅱ组穿膜细胞数( 24± 10)比对照组( 60± 9)要低( P< 0.05).结论: MCF 7的克隆形成率与 vMIP-Ⅱ的刺激浓度呈负相关. vMIP-Ⅱ能降低 MCF-7对 FN和 Matrigel的粘附和有效抑制 MCF-7 对人肺蛋白粗提物的靶向性趋化作用.
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TUNEL法检测重组vMIP-Ⅱ对SIV感染模型淋巴细胞凋亡的影响
目的探讨TUNEL技术检测的vMIP-Ⅱ对SIV感染的猴淋巴组织中淋巴细胞凋亡的影响是否与其引起的感染淋巴组织中细胞的增殖有关.方法取3个剂量组的vMIP-Ⅱ注射治疗后的SIV感染模型的淋巴组织标本,用TUNEL法检测每个剂量组动物模型淋巴细胞凋亡率.结果vMIP-Ⅱ治疗的3个剂量组与实验对照组相比、组间相比细胞凋亡率无显著性差异(P＞0.05).结论3个剂量组的vMIP-Ⅱ对SIV感染后的猴淋巴组织淋巴细胞凋亡无影响,但药物剂量与细胞凋亡率却呈负相关.
