首页 > 文献资料
-
高原鼠兔血清中N-isopropyl oxamate的RP-HPLC检测方法的建立
目的:探索N-isopropyl oxamate和血清蛋白结合水平,建立高原鼠兔血液中精子型乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性抑制剂N-isopropyl oxamate的高效液相色谱(HPLC)检测方法.方法:取体重150 ～ 200 g高原鼠兔20只,随机分为对照组和抑制剂组(n=10).通过外源性加入不同浓度的N-isopropyl oxamate,检测其与血清蛋白的结合水平.采用将血清先用胰蛋白酶酶解,再加入三氯乙酸的前处理法进行HPLC检测.结果:当空白高原鼠兔血清加入抑制剂标准品达到血清中浓度为0.05 mmol/L、0.1mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L、16.7 mmol/L、33.3 mmol/L、100 mmol/L时,抑制剂与血清蛋白的结合率分别为100％、100％、100％、86.84％、54.11％、40.10％、20.18％.在本文建立的方法下,回收率、精密度、稳定性均良好.N-isopropyl oxamate在0.0125 ～ 0.25 mmol/L内浓度与峰面积线性关系好.空白血清加入标准品达到终浓度为0.15 mmol/L、0.3 mmol/L和l mmol/L时,平均回收率分别为98.05％、98.98％、98.12％;精密度相对标准偏差(RSD)分别为1.17％、0.92％、0.83％;稳定性RSD分别为1.38％、1.40％、0.88％.方法的重复性RSD为1.76％,低定量限为0.0125 mmol/L.结论:N-isopropyl oxamate与高原鼠兔血清具有很强的亲和力,直接用三氯乙酸沉淀蛋白的前处理方法无法准确检测其浓度,而先用胰蛋白酶消化血清,再用三氯乙酸沉淀蛋白的方法可实现血液中HPLC的精确检测.
