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使用两种培养基一种气体条件分离高原鼠兔肠道菌
目的 使用脑心浸液羊血培养基和KF链球菌羊血培养基对高原鼠兔肠道菌进行分离,以了解脑心浸液羊血培养基上所分离的细菌菌属的种类和丰度,同时用KF链球菌羊血培养基对高原鼠兔肠道菌进行选择性分离以了解高原鼠兔肠道中是否存在新种链球菌.方法 使用脑心浸液羊血培养基和KF链球菌羊血培养基,在5％ CO2气体条件下对高原鼠兔肠道菌进行培养和分离,使用16S rDNA全长序列分析等方法鉴定细菌.结果 从20份高原鼠兔肠内容物标本中共分离607株细菌,可鉴定为19个属,31个种.其中用脑心浸液羊血培养基分离鉴定了495株细菌的19个属,用KF链球菌羊血培养基分离鉴定了112株细菌的3个属.分离鉴定的607株细菌,在属水平上,节杆菌属、肠球菌属、芽孢杆菌属为优势菌属,分别占31.47％、16.14％和15.98％;在种水平上,Arthrobacter luteolus、Enterococcus faecium为优势种.一些菌种为具有医学意义的细菌,如Yersinia enterocolitica、Staphylococcus haemolyticus、Staphylococcus epidermidis等.结论 脑心浸液羊血培养基上所分离的菌属丰富,本次实验中尚未发现链球菌新种,分布广泛的青藏高原鼠兔肠道中携带多种致病菌和潜在致病菌.
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高原鼠兔低氧适应分子机制的研究进展
高原鼠兔(Ochotona curzoniae) 是生活在青藏高原海拔3000～5000m地区的特有物种,具有极强的低温、低氧耐受能力.近十几年来,许多国内外学者从整体水平及分子水平对高原鼠兔的低氧适应机制进行了大量研究,认为该动物是研究低氧适应的理想动物模型.本文对高原鼠兔的低氧适应机制从血液学特征、肺血管的结构和功能及分子生物学研究等方面作一系统阐述,旨在阐明高原土生动物在高寒缺氧环境中生存的适应机制,这对人类适应高原及高原疾病的防治有着重要的指导意义.
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甘肃省玛曲县高原鼠兔肝毛细线虫感染的调查
目的:了解高原鼠兔肝毛细线虫感染状况,探讨对人与家畜的危害.方法:在甘肃省玛曲县尼玛镇、欧拉乡、金矿和大水等地区草场,通过徒手和粘鼠板捕获高原鼠兔,解剖肝脏,肉眼和光镜下观察.结果:共捕获高原鼠兔209只,肝毛细线感染率为10.2%;其中尼玛镇草场鼠兔感染率18.0%,大水鼠兔感染率仅为5.1%,肉眼和镜下均观察到肝毛细线感染所致肝组织的损害.结论:高原鼠兔是肝毛细线虫的宿主之一,为肝毛细线虫重要的储存宿主,提示在当地可能存在人体和家畜肝毛细线虫感染.
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3000 MLD/g C型肉毒杀鼠素饵粒对高原鼠兔的灭效试验
目的 在青海省冬季条件下测定新型3000 MLD/g C型肉毒杀鼠素饵粒对高原鼠兔的灭效.方法 试验共设10个面积均为1 hm~2的小区,其中3000 MLD/g C型肉毒杀鼠素饵粒与0.1%燕麦毒饵的100万MLD/ml C型肉毒梭菌毒素水剂对照处理各为4次重复,空白对照区2次重复.试验采用洞口投饵方式.结果 灭前试验区高原鼠兔平均密度为(923.1±34.9)洞口/hm~2.投饵后第6天3000 MLD/g C型肉毒杀鼠素饵粒处理组平均校正灭洞率为(91.14±0.17)%,0.1%的水剂处理组平均校正灭洞率为(89.00±0.63)%,二者灭效差异有统计学意义.试验期间,未发现非靶标动物中毒死亡现象.结论 3000 MLD/g C型肉毒杀鼠素饵粒对高原鼠兔的灭效优于C型肉毒梭菌毒素水剂,但在长时间及大范围内,该药剂的安全性需要进一步的验证.
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C肉毒杀鼠素对高原鼠兔的再遇适口性试验
目的:观察C肉毒杀鼠素对高原鼠兔的再遇适口性.方法:用霍恩氏法测定该制剂对试验动物的LD50.结果:对照组摄食系数为0.75,试验组摄食系数为1.03.结论:该制剂的适口性极佳,是优良的生物灭鼠剂.
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阿尔金山自然保护区高原鼠兔夏季微生境选择的主导因子分析
目的 研究阿尔金山国家级自然保护区高山草甸和高山荒漠区高原鼠兔夏季生境选择的主要影响因素,为科学防控提供依据.方法 2012年7-8月,累计设置和调查鼠兔活动洞群内5m×5m样方69个,另外在附近相同生境类型中无鼠兔活动地方设置对照样方62个.记录样方所在地的海拔高度、植物种数、植被盖度、植被高度、土壤硬度以及距道路的距离等指标.结果 活动洞群和对照样方植被高度、植被密度、坡度、海拔高度、植被类型和土壤硬度等生态因子方面差异有统计学意义(P＜0.05).主成分分析表明影响高原鼠兔生境选择的主要因子依次是坡度(0.886)、植物种数(-0.865)和土壤硬度(0.834).结论 高原鼠兔倾向于选择海拔高,坡度陡,植被高度低,而植物密度高,土壤硬度小的高寒草地或高寒荒漠生境.该结果为利用植被改良调控高原鼠兔密度提供了重要依据.
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飞机播撒杀鼠剂对高原鼠兔的防治效果
目的 调查飞机播撒杀鼠剂对高原鼠兔的防治效果以及飞机防治高原鼠害的可行性.方法 于2016年10月在青海省门源县北山乡,使用直升机开展飞机播撒地芬·硫酸钡生物杀鼠剂试验,灭鼠面积为1 000 hm2.试验前后,采用样带法调查灭鼠区和对照区高原鼠兔的种群密度.采用单因素方差分析比较试验前后样地内高原鼠兔种群密度差异.结果 地芬·硫酸钡生物杀鼠剂对高原鼠兔种群防治效果显著,毒饵投放后第5天,85.00％的毒饵被消耗;室内饲喂毒饵后第4天,高原鼠兔全部死亡.飞机播撒杀鼠剂可以将高原鼠兔的种群密度降低74.67％.结论 飞机投饵防治高原害鼠具有快速、高效、投药均匀等优点,效果良好.
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D型肉毒毒素草地灭鼠试验
为测试D型肉毒毒素对高原鼠兔的杀灭效果,2000年3月份,我们用自制的D型肉毒毒素,在果洛州大武镇州牧科所牧场冬季草场进行了灭鼠试验.
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高原鼠兔在东北地区的心电图观测研究
为探讨高原鼠兔作为实验性心电图观察的应用前景,描记了30例成年高原鼠兔心电图.结果表明,高原鼠兔心电图的基本波形与人类相似,均为窦性心律.其心率较快,359.6±28.3次/min;P波通常出现在T波的降支上;其Q-T间期,K值较大鼠、小鼠和长爪沙鼠大;心电轴为59.5±43.6度;有S-T段的个体出现率为73%.高原鼠兔较大鼠、小鼠和长爪沙鼠的心电图更接近于人,提示它更适于做临床心电图的实验研究.
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复方伊维菌素和球虫粉联合应用于高原鼠兔球虫的驱治效果观察
目的 探求一种安全高效的驱治高原鼠兔球虫的方法.方法 选用复方伊维菌素干悬浮剂和天字球虫粉2种抗寄生虫药,采取经口给药(灌服和加人饲料、饮水),观察驱治效果.结果 实验室检测到高原鼠兔感染的球虫属艾美尔科,艾美尔属,初步鉴定出5个种,总感染率87.09%(108/124).给药1 d后,阳性率下降为39.51%,30 d后为14.51%,第45 d为0.结论 针对野生感染的球虫,采用复方伊维菌素干悬浮剂和天字球虫粉联合驱治效果良好,为人工饲养高原鼠兔的寄生虫病防治和寄生虫质量监测提供参考.
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高原鼠兔解剖学特征之初探
对成年高原鼠兔进行了解剖学观测,发现其骨骼数(尤其肋、籽骨数)较免多.盲肠十分发达(螺旋瓣数多达45～53个).心、肝、脾、肺、肾等多数脏器的绝对重量为雌性略低于雄性,但无统计学意义.而雌性的脏器系数则显著高于雄性(P＜0.01).胸腺的绝对重量为雌性高于雄性(P＜0.05),且随体重增加而减小.从解剖学上看,高原鼠兔的身体各部形态结构与其习性、活动及健康状况密切相关.
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盐酸氯胺酮对高原鼠兔麻醉效果观察
目的探讨不同剂量盐酸氯胺酮麻醉高原鼠兔的效果.方法将48只高原鼠兔随机分成4组,按22、33、44mg/kg体重给予盐酸氯胺酮行肌内注射麻醉,第4组注射生理盐水0.15 mL.结果给予盐酸氯胺酮后高原鼠兔分别在(110.0±6.74)s、(122.73±11.76)s、(117.27±21.11)s进入麻醉状态,维持时间分别为(1418.18±42.25)、(1680.00±117.80)、(1929.09±88.48)s.高原鼠兔麻醉前和麻醉维持期间不同剂量组的呼吸频率、心跳频率和体温差异无显著性(P＞0.05).结论盐酸氯胺酮行肌内注射麻醉是一种有效而安全的麻醉方法,适宜剂量为肌内注射22～44mg/kg体重,能为高原鼠兔的应用提供良好的麻醉效果.
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低氧环境下大鼠与高原鼠兔血液中NO与ET-1比较
目的比较低氧环境下大鼠与高原鼠兔血液中NO与ET-1含量.方法将Wistar大鼠暴露于3 780 m低氧环境中,分别于低氧24 h、2周、3周后取血,以酶联免疫吸附法和硝酸还原酶法测定血液中ET-1、NO含量,计算NO/ET-1比值,并与高原鼠兔比较.结果急进高原24 h后,大鼠血液中的NO与ET-1比同海拔的鼠兔显著增加(P<0.01),而两者NO/ET-1比值却非常接近(P>0.05).随着大鼠在高海拔停留时间延长,血液中NO呈减少趋势,而ET-1呈上升趋势.高原鼠兔NO/ET-1值约是大鼠缺氧2、3周时的2倍(P<0.01).结论适当的NO/ET-1比值是高原鼠兔对高原低氧环境的一种适应性选择.急进高原时,NO显著增加和适当的NO/ET-1值是机体对抗肺动脉高压的一种有效的代偿性机制;随着缺氧时间延长,NO、NO/ET-1值的降低及ET-1的增加,可能是机体不适应低氧环境的一个指征.
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高原鼠兔血清中N-isopropyl oxamate的RP-HPLC检测方法的建立
目的:探索N-isopropyl oxamate和血清蛋白结合水平,建立高原鼠兔血液中精子型乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性抑制剂N-isopropyl oxamate的高效液相色谱(HPLC)检测方法.方法:取体重150 ～ 200 g高原鼠兔20只,随机分为对照组和抑制剂组(n=10).通过外源性加入不同浓度的N-isopropyl oxamate,检测其与血清蛋白的结合水平.采用将血清先用胰蛋白酶酶解,再加入三氯乙酸的前处理法进行HPLC检测.结果:当空白高原鼠兔血清加入抑制剂标准品达到血清中浓度为0.05 mmol/L、0.1mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L、16.7 mmol/L、33.3 mmol/L、100 mmol/L时,抑制剂与血清蛋白的结合率分别为100％、100％、100％、86.84％、54.11％、40.10％、20.18％.在本文建立的方法下,回收率、精密度、稳定性均良好.N-isopropyl oxamate在0.0125 ～ 0.25 mmol/L内浓度与峰面积线性关系好.空白血清加入标准品达到终浓度为0.15 mmol/L、0.3 mmol/L和l mmol/L时,平均回收率分别为98.05％、98.98％、98.12％;精密度相对标准偏差(RSD)分别为1.17％、0.92％、0.83％;稳定性RSD分别为1.38％、1.40％、0.88％.方法的重复性RSD为1.76％,低定量限为0.0125 mmol/L.结论:N-isopropyl oxamate与高原鼠兔血清具有很强的亲和力,直接用三氯乙酸沉淀蛋白的前处理方法无法准确检测其浓度,而先用胰蛋白酶消化血清,再用三氯乙酸沉淀蛋白的方法可实现血液中HPLC的精确检测.
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青藏高原青海田鼠型鼠疫菌危害性研究
目的 探讨青海田鼠型鼠疫菌的危害性.方法 通过现场调查和实验方法,研究青海田鼠型鼠疫菌对小白鼠、豚鼠、家兔等的毒力.高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌的感受性,藏系绵羊、高原牦牛以及人群血清鼠疫FI抗体检测等.结果 青海田鼠型鼠疫菌的毒力:对小白鼠的小致死量(MLD)为106、半数致死量(LD50)为43.6(10.5～116.7),对豚鼠的MLD为109、LD50为5.6×106(2.2×105～1.5×108),大剂量的青海田鼠型菌可引起个别家兔死亡,但个体差异很大,存在高抗个体.在藏系绵羊中检测出11份鼠疫阳性血清,阳性率达3.6%;本次所检测的牦牛及人群血清全部为阴性;高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌具有高抗、低感受性.结论 青海田鼠型鼠疫菌有一定毒力,高原鼠兔对此菌有较高的抗性,不足以引起此菌的传播.对家畜具有一定的危害性.
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高原鼠兔部分生理及血液生化测定值
测定已驯化成年高原鼠兔的部分生理及血液生化值.结果:高原鼠兔的血压与兔和豚鼠接近;其心率、呼吸频率较兔快,但低于小鼠;其耗氧量高于兔、豚鼠和大鼠,而与小鼠接近;其血清白蛋白和甘油三酯含量均高于家兔和人,而血清胆固醇则低于家兔和人.
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高原鼠兔心脏中Ldh-c基因的表达及其对无氧糖酵解水平的影响
高原鼠兔(Ochotona curzoniae)对高原低氧环境有很强的适应性.本研究组前期研究显示,精子特异性乳酸脱氢酶(sperm-specific lactate dehydrogenase,LDH-C4)基因Ldh-c在高原鼠兔心、肝、脑、肌肉等组织中都有表达.本研究为了阐明LDH-C4对高原鼠兔心肌组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组,每组10只.抑制剂组注射1 mL l mol/L LDH-C4特异性抑制剂N-isopropyl oxamate于高原鼠兔股二头肌,双侧各注射500 μL;空白对照组注射等量的生理盐水.应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定LDH-C4基因Ldh-c在高原鼠兔心肌组织中的mRNA和蛋白表达水平;比较抑制剂组和空白对照组高原鼠兔心肌组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;以及乳酸(lactate,LD)和ATP含量.结果显示,在mRNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中均有表达,相对表达量分别为0.47±0.06和0.68±0.08;当肌肉注射1 mL l mol/L的N-isopropyl oxamate时,30 min后血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L,与空白对照组相比,抑制剂组心肌组织中LDH活力[(6.18±0.48) U/mg vs (9.08±0.58) U/mg]、LD [(0.21±0.03) mmol/g vs (0.26±0.04) mmol/g]和ATP含量[(4.40±0.69) nmol/mg vs (6.18±0.73) nmol/mg]显著下降(P＜0.01).N-isopropyl oxamate对LDH活力、LD和ATP含量的抑制率分别为31.98％、20.90％和28.70％.以上结果说明:Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中表达;LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为心肌组织的活动提供至少28％的ATP,这可能降低高原鼠兔在低氧环境中对氧气的依赖,增强其对低氧环境的适应.
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高原鼢鼠和高原鼠兔骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的差异
高原鼠兔(Ochotona curzoniac)和高原鼢鼠(Myospalax baileyi)是青藏高原地区特有的土著动物.本文旨在探讨高原鼠兔和高原鼢鼠骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的不同生理机制.我们克隆出两种动物肝脏中的丙酮酸羧化酶(pytuvate carboxylase,PC)基因的部分序列；应用real-time PCR法测定两种动物肝脏和骨骼肌中PC、LDH-A和LDH-B mRNA的表达水平；使用苹果酸偶联法测定肝脏中PC酶活力,并测定两种动物骨骼肌和肝脏中乳酸含量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力；用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察肝脏和骨骼肌LDH同工酶谱.结果显示:(1)高原鼢鼠骨骼肌LDH-B mRNA的表达量极显著高于高原鼠兔(P＜0.01),而LDH-A mRNA的表达量没有差异(P＞0.05)；(2)高原鼠兔肝脏中PC、LDH-A和LDH-B mRNA的表达量都极显著高于高原鼢鼠(P＜ 0.01)；(3)高原鼠兔肝脏和骨骼肌中LDH和乳酸含量以及肝脏中PC活力均极显著高于高原鼢鼠(P＜ 0.01); (4) LDH同工酶谱显示,高原鼠兔骨骼肌以LDH-A4、LDH-A3B、LDH-A2B2为主,而高原鼢鼠骨骼肌以LDH-AB3、LDH-B4为主；在高原鼠兔肝脏中LDH以LDH-A3B,LDH-A2B2,LDH-AB3和LDH-B4为主,而高原鼢鼠肝脏只有LDH-A4.以上结果表明,高原鼠兔通过提高骨骼肌无氧糖酵解的水平为其快速奔跑提供能量,通过提高肝脏中糖异生水平快速将骨骼肌运动所产生的乳酸转化为葡萄糖和糖原,所以减少了在低氧环境中对氧的依赖,而高原鼢鼠尽管生活在低氧的地下洞道,它通过提高骨骼肌有氧糖酵解的水平,为其持续的挖掘活动提供能量.
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高原鼠兔和Sprague-Dawley大鼠离体主动脉环对低氧的收缩反应
本文旨在观察低氧对Sprague-Dawley (SD)大鼠和高原鼠兔(Ochotona curzoniae)离体主动脉环张力的影响.分别制备SD大鼠和高原鼠兔主动脉环,采用离体血管环灌流方法,经生物信号采集与分析系统测定不同药物或1h低氧处理对内皮完整和去内皮血管环张力的影响.结果显示,SD大鼠和高原鼠兔主动脉环对高钾(80 mmol/L KCl)的收缩反应之间无明显差异.SD大鼠内皮完整的主动脉环对ACh有明显的舒张反应,去内皮的主动脉环则对ACh没有舒张反应；与SD大鼠相反,无论是否去内皮,预收缩的高原鼠兔主动脉环经ACh(1 μmol/L)处理后出现收缩反应.无论是否去内皮,有钙或无钙的Kreb's液孵育,高原鼠兔主动脉环低氧处理后的收缩率均明显高于SD大鼠.以上结果提示,高原鼠兔和SD大鼠相比,主动脉对低氧的收缩反应更敏感,而这个增强的反应主要依赖于主动脉平滑肌细胞钙库的内钙释放.
关键词： 高原鼠兔 Sprague-Dawley大鼠 胸主动脉环 血管收缩 低氧 -
高原鼢鼠和高原鼠兔肝脏苹果酸天冬氨酸穿梭系统的功能差异
为了探讨高原鼢鼠(Myospalax baileyi)和高原鼠兔(Ochotona curzoniae)在低氧环境下适应耐力性挖掘活动和快速奔跑的生理机制,本文比较研究了这两种高原动物肝脏中苹果酸天冬氨酸穿梭系统(malate-spartate shuttle system,MA)的功能差异.测定高原鼢鼠和高原鼠兔的肝脏体重比、肝细胞中线粒体参数和血清中乳酸含量,克隆细胞质型苹果酸脱氢酶(cytoplasmic malate dehydrogenase,MDHI)和线粒体型苹果酸脱氢酶(mitochondrial malate dehydrogenase,MDH2)基因的编码区以及谷氨酸天冬氨酸转运蛋白(aspartate glutamate carrier,AGC)和苹果酸-α-酮戊二酸转运蛋白(oxoglutarate malate carrier,OMC)基因的部分序列;应用real-time PCR测定肝脏中MDH1、MDH2、AGC和OMC mRNA的表达水平；应用酶学方法测定了MDH1和MDH2的酶活力.结果显示:(1)高原鼢鼠肝脏体重比极显著地高于高原鼠兔(P＜0.01),肝细胞线粒体数目和表面积显著高于高原鼠免(P＜0.05)；高原鼠兔血清乳酸含量极著高于高原鼢鼠(P＜0.01);(2)高原鼢鼠肝脏中MDHI mRNA表达水平和酶活力均极显著高于高原鼠兔(p＜0.01),高原鼢鼠肝脏中MDH2 mRNA表达水平极显著高于高原鼠兔(P＜0.01),酶活力显著高于高原鼠兔(P＜0 05)；高原鼢鼠肝脏AGC mRNA表达量极显著高于高原鼠兔(P＜0.01),OMC mRNA表达量无显著性差异(P＞0 05);(3)高原鼠兔肝脏中MDH1 mRNA表达水平和酶活力极显著低于MDH2(P＜0.01),高原鼢鼠肝脏中MDH1mRNA表达水平极显著高于MDH2 (P＜0.01),酶活力没有显著性差异(P＞0.05).这些结果说明高原鼢鼠通过增强MA的穿梭能力提高了对耐力性挖掘活动能量的供应,而高原鼠兔通过增强肝脏糖异生的作用为短暂快速的运动提供能源物质,从而有效地将骨骼肌无氧糖酵解产生的乳酸转化为糖原,减少了对氧的依赖性.
关键词： 苹果酸天冬氨酸穿梭系统 高原鼢鼠 高原鼠兔 低氧 糖异生
