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丙酮酸羧化酶在上皮性卵巢癌中的表达及其生物学意义
目的:检测丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC)在上皮性卵巢癌中的表达水平及其临床病理学意义,并进一步探讨沉默PC基因的表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖及迁移的影响.方法:分别采用蛋白质印迹法和免疫组织化学方法检测PC在上皮性卵巢癌及其相应的癌旁组织中的表达水平;统计分析PC表达与患者年龄、有无腹腔积液、临床TNM分期及病理分级等临床病理特征之间的关系.通过构建特异性针对PC基因的PC-shRNA沉默SKOV3细胞中PC的表达水平,并采用MTT法、二维克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及细胞迁移实验,观察沉默PC表达对SKOV3增殖及迁移能力的影响.结果:PC在卵巢癌组织中的表达水平明显高于其对应的癌旁组织(t=20.4,P＜ 0.01);PC蛋白高表达与患者发生腹腔积液和临床分期有关(P值均＜0.05).沉默PC的表达可以显著抑制SKOV3细胞的增殖和迁移能力(P值均＜0.01).结论:PC在上皮性卵巢癌组织中高表达,PC与卵巢癌的发生和发展密切相关,可作为卵巢癌临床治疗的潜在靶点.
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高原鼢鼠和高原鼠兔骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的差异
高原鼠兔(Ochotona curzoniac)和高原鼢鼠(Myospalax baileyi)是青藏高原地区特有的土著动物.本文旨在探讨高原鼠兔和高原鼢鼠骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的不同生理机制.我们克隆出两种动物肝脏中的丙酮酸羧化酶(pytuvate carboxylase,PC)基因的部分序列；应用real-time PCR法测定两种动物肝脏和骨骼肌中PC、LDH-A和LDH-B mRNA的表达水平；使用苹果酸偶联法测定肝脏中PC酶活力,并测定两种动物骨骼肌和肝脏中乳酸含量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力；用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察肝脏和骨骼肌LDH同工酶谱.结果显示:(1)高原鼢鼠骨骼肌LDH-B mRNA的表达量极显著高于高原鼠兔(P＜0.01),而LDH-A mRNA的表达量没有差异(P＞0.05)；(2)高原鼠兔肝脏中PC、LDH-A和LDH-B mRNA的表达量都极显著高于高原鼢鼠(P＜ 0.01)；(3)高原鼠兔肝脏和骨骼肌中LDH和乳酸含量以及肝脏中PC活力均极显著高于高原鼢鼠(P＜ 0.01); (4) LDH同工酶谱显示,高原鼠兔骨骼肌以LDH-A4、LDH-A3B、LDH-A2B2为主,而高原鼢鼠骨骼肌以LDH-AB3、LDH-B4为主；在高原鼠兔肝脏中LDH以LDH-A3B,LDH-A2B2,LDH-AB3和LDH-B4为主,而高原鼢鼠肝脏只有LDH-A4.以上结果表明,高原鼠兔通过提高骨骼肌无氧糖酵解的水平为其快速奔跑提供能量,通过提高肝脏中糖异生水平快速将骨骼肌运动所产生的乳酸转化为葡萄糖和糖原,所以减少了在低氧环境中对氧的依赖,而高原鼢鼠尽管生活在低氧的地下洞道,它通过提高骨骼肌有氧糖酵解的水平,为其持续的挖掘活动提供能量.
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丙酮酸羧化酶在胃腺癌中的表达及临床意义
目的 检测丙酮酸羧化酶(PC)在胃腺癌组织中的表达并分析其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法及Western blot法检测PC蛋白在胃腺癌及其对应癌旁组织的表达情况,分析其在肿瘤中表达水平与患者年龄、性别、TNM分期及病理分级等临床病理资料之间的关系,并用Western blot法检测PC蛋白在不同分化胃癌细胞系及永生化胃黏膜上皮细胞系的表达情况.结果 免疫组化及Western blot法均显示PC在胃腺癌组织表达水平显著高于其对应癌旁组织(P＜0.01).PC高表达与患者TNM分期及病理分级显著相关(P＜0.05),而与患者性别、年龄无明显相关性(P＞0.05).Western blot法显示PC在不同分化胃癌细胞系表达水平显著高于永生化胃黏膜上皮细胞(P＜0.01).结论 PC高表达与肿瘤的恶性进展密切相关,提示PC有可能作为胃癌生物治疗的潜在靶点.
关键词： 丙酮酸羧化酶 胃腺癌 免疫组织化学 Western blot TNM分期
