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姜黄素对脂多糖诱导人支气管上皮细胞 丝裂素活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导人支气管上皮细胞三磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子-κB(NF-κB)、不规则趋化因子(CX3CL1)表达的影响.方法 体外培养人支气管上皮细胞24 h后,用计算机生成的随机分配法表分为空白组(CK)、LPS(10 mg/L)组、PD组 (LPS+ ERK抑制剂PD98059,25μmol/L)、LY组(LPS+ PI3K/Akt抑制剂LY294002,20μmol/L)、PDTC组 (LPS+ NF-κB抑制剂PDTC,100μmol/L)、cur组(LPS+姜黄素,10μmol/L)6组.各组阻断剂预处理30 min后给予LPS刺激,加药后作用4 h,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测各组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达,测定各条带吸光度(A)值.结果 与CK组比较,LPS组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均显著升高〔PI3K(A值):0.68±0.05比0.49±0.09,Akt(A值):0.54±0.03比0.30±0.06,ERK(A值):1.09±0.09比0.74±0.05、NF-κB(A值):1.87±0.15比0.57±0.30,CX3CL1(A值):0.62±0.12比0.34±0.00,均P<0.05〕.与LPS组比较,PD组、PDTC组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均明显下降〔PI3K(A值):0.37±0.06、0.38±0.16比0.68±0.05,Akt(A值):0.33±0.07、0.33±0.12比0.54±0.03,ERK(A值):0.67±0.05、0.82±0.26比1.09±0.09,NF-κB(A值):0.73±0.19、0.97±0.41比1.87±0.15,CX3CL1(A值):0.43±0.07、0.32±0.03比0.62±0.12,均P<0.05〕;cur组能明显抑制PI3K、Akt、ERK、NF-κB表达〔PI3K(A值):0.44±0.04比0.68±0.05, Akt(A 值):0.30±0.10 比 0.54±0.03,ERK(A 值):0.78±0.05 比 1.09±0.09,NF-κB(A 值):0.78±0.17 比1.87±0.15,均P<0.05〕.结论 人支气管上皮细胞存在LPS—ERK、NF-κB—CX3CL1信号通路,姜黄素可抑制LPS诱导人支气管上皮细胞后PI3K/Akt、ERK、NF-κB的表达.
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继发性甲状旁腺功能亢进患者血清对内皮细胞的影响及Klotho蛋白的保护作用
目的:观察继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增生、凋亡、一氧化氮(NO)合成的影响,并探讨Klotho蛋白的保护作用及机制. 方法:分别收集15例健康人、10例不伴SHPT的CKD 5期患者、15例SHPT拟手术治疗的患者混合血清,体外培养HUVEC.以健康人血清为正常对照,观察SHPT患者血清、不伴SHPT的CKD5期患者血清处理细胞24h后对细胞增生的影响(CCK-8),观察不同浓度、不同时间SHPT血清对HUVEC增生的影响.在10％ SHPT血清环境下,以不同浓度Klotho蛋白干预24h,检测HUVEC增生、凋亡(流式细胞术)、NO合成(硝酸盐还原法).加/不加PD98059[细胞外调节蛋白激酶(ERK) 1/2抑制剂],检测总ERK(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)(Western印迹法检测). 结果:不伴SHPT的CKD 5期患者血清和SHPT患者血清均可抑制细胞增生,且SHPT血清对于细胞增生的抑制作用较不伴SHPT的CKD5期患者血清显著(P＜0.05).在一定浓度范围内(5％～20％),随着SHPT血清浓度增加,细胞增生受抑制(P＜0.05),呈现浓度依赖性.10％ SHPT血清处理细胞6h、12h、24h,随着处理时间延长,细胞增生受抑制(P＜0.05),呈现时间依赖性.50～ 100 ng/ml Klotho蛋白干预可部分恢复10％ SHPT血清处理后HUVEC的增生活力(P＜0.05)、抑制其凋亡,并上调p-ERK表达,且可被PD98059阻断.SHPT血清作用下,HUVEC中NO合成减少(P＜0.05),Klotho蛋白干预可促进NO合成(P＜0.05). 结论:SHPT血清抑制HUVEC增生和NO合成.Klotho蛋白可部分拮抗SHPT血清对HUVEC增生的抑制作用,并促进NO合成,其促进HUVEC增生的机制可能与其抗凋亡作用及上调p-ERK有关.
