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中国地鼠卵巢细胞文献资料
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慢病毒介导的人凝血因子Ⅷ高效真核表达系统的建立
目的 应用慢病毒载体系统建立高效稳定表达人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的细胞株并评估该表达系统的生物安全性.方法 构建携带人B区缺失FⅧ(BDDhFⅧ)和绿色荧光蛋白基因的慢病毒转移质粒BDDhFⅧ/pXZ9及对照pXZ9,包装并浓缩慢病毒颗粒.体外感染中国地鼠卵巢(CHO)细胞后72 h取培养上清,ELISA法测定FⅧ抗原表达水平,一期促凝法测定FⅧ活性,RT-PCR检测感染后CHO细胞中FⅧ的转录.检测载体复制能力以评估安全性.结果 成功构建携带BDDhFⅧ和绿色荧光蛋白基因的慢病毒转移质粒BDDhFⅧ/pXZ9及对照质粒pXZ9,并制备出出高滴度的慢病毒.该慢病毒载体可高效感染CHO细胞,感染后72 h培养上清中FⅧ抗原浓度为(1724.9±283.7)mU/ml,FⅧ活性为(10.58±1.55)％,RT-PCR检测到BDDhFⅧ基因的转录.感染后的CHO细胞未检测到gag基因的表达,培养上清中也未检测到病毒.结论 慢病毒可以介导人FⅧ在CHO细胞内高效表达；该表达系统不产生子代病毒,具有良好的生物安全性.
