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血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体的检测及其与因子ⅧC区的关系
本研究应用快速而敏感的ELISA法检测血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体,并探讨其与因子ⅧC区的关系.收集140例血友病A患者样本,其中重型(FⅧ∶C＜1％)84例,中型(FⅧ∶C 1-5％)34例,轻型(FⅧ∶C＞5％)22例；患者均已经过因子Ⅷ替代治疗.正常对照样本80例.以本室制备的抗因子Ⅷ单克隆抗体包被酶标板,封闭后加入重组人凝血因子Ⅷ,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG,OPD显色,记录A490,以正常人血浆为对照,样本A490大于正常人对照3 SD定义为因子Ⅷ抗体阳性.以抗His抗体包被酶标板,封闭后加入本室制备的rFⅧ-C1C2区蛋白,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG,OPD显色,记录A490,以正常人血浆为对照,样本A490大于正常人对照3 SD定义阳性.结果表明,通过ELISA法检测,56例(40％)血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体阳性,其中46例(82.1％)因子Ⅷ同种抗体阳性的血浆样本中存在与因子ⅧC1C2结合的同种抗体.结论:因子ⅧC功能区是中国血友病A患者因子Ⅷ同种抗体的主要结合部位之一.
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血友病患者实施全髋人工关节置换的手术全期护理
目的 探讨对血友病患者实施全髋人工关节置换的手术全期护理.方法 对5例实施全髋人工关节置换术的血友病患者,在手术前期重点关注凝血Ⅷ因子水平参数,进行针对性的心理护理;手术中期严密观察出血情况,采取相应护理对策,并加强预防感染措施;手术后期继续观察出血倾向,指导正确的康复锻炼,防止关节脱位及关节内出血.结果 本组5例患者术中出血量均控制在500～600 ml,术后无异常出血,切口愈合时间为10～15 d,未出现感染等并发症,髋关节功能恢复良好.结论 全髋人工关节置换合并血友病患者的手术风险与护理难度大,手术室护士应制定严谨的手术全期护理计划,根据不同时期病情的特征给予不同的护理模式,提高患者的治疗效果,防止护理并发症发生.
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血友病 A 患儿血浆纠正实验与凝血因子Ⅷ抑制物相关性研究
目的通过ROC曲线分析，确定利用部分促凝血酶原时间（ APTT）纠正试验结果预测凝血因子抑制物产生的临界诊断点。方法2012年11月至2014年7月于北京儿童医院血液肿瘤中心血友病门诊就诊的275例血友病A（HA）患儿，筛查期中位月龄为58（1～200）个月；重型197例（71．6％）、中间型78例（28．4％）。回顾分析343例次HA患儿的APTT纠正实验及抑制物定量监测结果，并应用ROC曲线分析其抑制物阳性的佳临界点。结果 ROC曲线下面积（ AUC）＝0．973（95％CI 0．960～0．986，P＜0．01），Youden值为0．824，所对应的孵育法APTT为39．7 s，为有无抑制物的佳诊断界点。此时敏感度为87．2％，诊断特异度为95．2％。 AUC＝0．982（95％ CI 0．967～0．998，P＜0．01），Youden值为0．896，所对应的孵育法APTT为53．4 s，此即区分低滴度与高滴度抑制物的佳诊断界点。此时敏感度为94．6％，诊断特异度为95．0％。结论 APTT纠正试验可为血友病患儿凝血因子Ⅷ抑制物产生的临床早期诊断提供一定参考和筛查指标。（中华检验医学杂志，2015，38：480－483）
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F8基因大片段缺失所导致的一例重型血友病A的分子发病机制研究
目的 对F8基因大片段缺失所导致的重型血友病A患者进行基因断裂点分析,探讨其分子发病机制.方法 筛查患者凝血功能相关指标,明确血友病A表型诊断.采用长距离PCR及序列特异PCR进行内含子22和内含子1倒位的检测,并对F8基因的所有外显子及其侧翼序列直接测序.基因步移的方法确定F8基因断裂点.断裂点特异双重PCR对携带者进行诊断.多重荧光PCR法检测6个微卫星DNA位点(F8Up226、F8Up146、F8Int13、F8Int25、F8Down48、DXS1073)多态性对家系进行遗传连锁分析验证.结果 先证者FⅧ活性＜1％,诊断为重型血友病A.患者F8内含子22及内含子1倒位均为阴性.F8基因4～7号外显子多次PCR扩增后电泳未见相应条带,其余外显子测序未发现突变.基因步移PCR扩增产物经测序发现F8基因共缺失27 685个碱基,并在断裂点融合处存在2个微小同源碱基,且插入7个碱基(CTCTTrCC).断裂点特异性双重PCR结果显示胎儿及该患者的女儿均为缺失携带者,与基因连锁分析结果相吻合.结论 F8基因4～7号外显子缺失导致患者发生重型血友病A,微小同源介导的末端连接等机制可能介导了缺失的发生.断裂点特异双重PCR为携带者的诊断提供了一个可靠的方法.
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凝血因子Ⅷ和Ⅸ实验室检测现状调查与分析
目的 了解国内实验室凝血因子Ⅷ、Ⅸ检测现状及存在的问题,为实施凝血因子Ⅷ、Ⅸ检测规范化及质量改进提供依据.方法 调查性研究.对76家实验室进行问卷调查研究,对54家实验室进行质控物活性检测调查研究.对调查问卷的回报信息进行统计分析,将质控物的检测结果按照检测试剂分为3组后进行分级评价.结果 72％(52/72)的实验室检测标本量少于30份/月.各实验室的定标频率不同,33％(24/72)的实验室未在每批样本检测前进行定标.39％(28/72)的实验室未开展室内质控,21％ (15/72)的实验室仅检测正常浓度水平质控物,个别实验室室内质控累积变异系数(CV)较大,超过30％.正常浓度水平质控物FⅧ、FⅨ检测结果的CV范围分别为11.3％ ～18.2％及11.3％ ～ 17.9％;异常浓度水平质控物FⅧ、FⅨ检测结果的CV范围分别为15.3％ ～20.3％及19.5％ ～21％.按照检测试剂分为3组,3组FⅧ检测结果不及格的实验室分别占18％、24％及22％;FⅨ检测结果不及格的实验室分别占20％、24％及28％.结论 国内凝血因子检测质量控制关键环节的要求有待明确和实施,部分实验室检测结果的重复性和可比性较差.拟通过制订凝血因子Ⅷ、Ⅸ检测规范化的技术要求,组织相关培训,建立全国室间质量评价计划等方式实施质量改进.
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凝血因子Ⅷ基因内四个短串联重复序列多态性及其在血友病A基因诊断中的应用
目的 调查中国人群凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子1、24、13和22中4个短串联重复序列(short tandern repeat,STR)的多态性,建立单管四重荧光PCR方法以用于血友病A的基因诊断.方法 采用单管四重荧光PCR扩增220名无血缘关系女性FⅧ基因内含子1、24、13和22内的STR片段,用ABI310型基因分析仪进行毛细管电泳分析片段长度,DNA测序检测二核苷酸重复数.用上述方法对96个血友病A家系进行基因诊断.结果 STR1、STR 24、STR13和STR22分别检出7、9、10和7种基因型;多态信息量(polymorphism information contents,PIC)分别为0.3789、0.4055、0.5239和0.4713;杂合度分别为34.55%(76/220)、38.18%(84/220)、49.55%(109/220)和43.64%(96/220).对96个血友病A家系进行基因诊断,STR1、STR24、STR13和STR22的单独可诊断率分别为38.54%(37/96)、38.54%(37/96)、54.17%(52/96)和42.71%(41/96),联合4个位点的可诊断率达79.17%(76/96).结论 采用单管四重荧光PCR同时检测4个STR位点,具有高效、简单快速的特点,是基因连锁分析进行血友病A基因诊断的有效方法.
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中国血栓性疾病的研究与诊治现状
自2014年起，国际血栓与止血协会把每年的10月13日定为“世界血栓日”，来提高人们对此类疾病的认识。血栓性疾病属于涉及多系统、临床医学多学科的疾病，因此今后的诊疗应走向多学科融合联合诊治模式。全面研究血栓性疾病的遗传因素则有望实现对这一类疾病的早期诊断与风险预测，从而实现精准诊断与个体化治疗。（中华检验医学杂志，2016，39：729-732）
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妊娠合并血友病
血友病是一种凝血功能障碍的X染色体隐性遗传性疾病，主要由于凝血因子Ⅷ或Ⅸ缺乏所致。妊娠合并血友病患者在整个孕期和分娩过程中均面临着出血的风险。本文就妊娠合并血友病的产前诊断、孕期管理、分娩方式、治疗及新生儿处理等作一介绍。
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胎儿甲型血友病的基因诊断
目的 探讨胎儿甲型血友病的产前基因诊断方法的临床应用价值.方法 2002年1月至2006年12月对北京朝阳医院妇产科19个甲型血友病家系进行基因携带者检测,应用长距离PCR(LD-PCR)技术检测其凝血因子Ⅷ(FⅧ)内含子22倒位情况,出现倒位者直接行脐静脉穿刺抽取脐带血进行胎儿血友病基因的产前诊断;非倒位者则联合应用多位点基因连锁分析技术先对携带者进行筛查,而后进行胎儿血友病基因的产前诊断.同时进行胎儿脐带血FⅧ水平的检测.结果 (1)对19例孕妇的22次妊娠的胎儿进行了产前诊断,平均脐静脉穿刺孕周为23周(17～34周),所有穿刺均获成功,无穿刺导致的胎儿丢失.(2)19个甲型血友病家系中,有14个家系检测出内含子22倒位,对其16次妊娠胎儿行产前甲型血友病基因诊断,其中10例胎儿诊断为甲型血友病;6例诊断为正常胎儿.(3)多位点基因连锁分析技术产前诊断甲型血友病胎儿6例,其中包括1例孕妇先后2次妊娠甲型血友病胎儿.(4)22例胎儿中有16例进行了FⅧ水平检测(未行检测的6例为孕周低于20周或因经济原因患者家属拒绝),FⅧ水平在0～198%之间,有11例胎儿FⅧ水平＜10%,其中除1例FⅧ水平为2%,诊断为正常胎儿并随访1年FⅧ水平正常外,其余10例胎儿均诊断为甲型血友病.结论 应用LD-PCR和多位点基因连锁分析技术可以快速有效地进行甲型血友病携带者的确认;胎儿脐带血FⅧ水平的检测有助于初步诊断,但确诊胎儿是否患病仍须有基因诊断结果.
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新生儿血友病七例临床分析并文献复习
目的 了解新生儿血友病的临床特点、治疗及预后. 方法 对郑州大学第一附属医院2012年7月至2016年3月收治的7例新生儿血友病病例资料进行回顾性分析. 结果 7例患儿均为男性,临床表现包括静脉穿刺点处血肿2例,头颅血肿5例,颅内出血2例,皮下出血3例,镜下血尿1例,肾上腺出血1例,1例无临床出血表现.实验室检查发现6例为凝血因子Ⅷ缺乏,1例为凝血因子Ⅸ缺乏;3例经基因检测证实诊断.7例患儿均给予血浆、冷沉淀、凝血因子Ⅷ等补充替代治疗.经治疗,6例好转出院,1例放弃治疗.随访至2016年4月,1例发生头颅血肿,1例发生膝关节血肿,3例发生皮下出血,3例无明显出血.3例间断补充凝血因子. 结论 对新生儿期有出血表现者,排除其他出血性疾病后应考虑血友病.行凝血因子活性水平检测可明确诊断.
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我国儿童血友病现状及诊断
1 现状血友病是一种缺乏因子Ⅷ或因子Ⅸ的性染色体连锁隐性遗传性出血性疾病,大规模的流行病学调查显示血友病的发病率为15～20/10万人口,无明显地区和种族差异.1986年至1989年全国24省、市,37个地区作血友病患病率的调查,调查人数16866 654人,总患病率2.73/10万(男性5.21/10万,女性0.06/10万),与欧美相比较低[1].
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扩增片段多态性结合银染法对广西汉族人FⅧ基因内(CA)n的研究
目的 研究广西汉族人群在FⅧ基因内含子13(CA)n及内含子22(GT)n(AG)n两位点的基因频率分布,并用于血友病甲的家系分析.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增FⅧ基因内含子13(CA)n及22(GT)n(AG)n的多态性片段,银染色法显示扩增结果;任选一标本,测其扩增片段长度获得其i13(CA)n及i22(GT)n(AG)n的具体重复数,从而推算出所有标本两位点的二核苷酸重复数.结果 在91名广西汉族人135条X染色体中,共检出6种i13(CA)n和4种i22(GT)n(AG)n,i13(CA)n位点基因频率在0.0002～0.5408间,多态信息量(polymorphism information content,PIC)为0.5899,实际杂合度为0.6364(28/44);i22(GT)n(AG)n位点基因频率为0.0444～0.4963,PIC为0.5359,实际杂合度为0.5227(23/44).13个有阳性家族史的血友病家系,用该方法进行家系分析,9个家系可作出诊断,可诊断率为69%.结论 (1)i13(CA)n、i22(GT)n(AG)n在广西汉族人中PIC高,是血友病甲家系分析中的有用位点;(2)相比FⅧ相关的某些单个限制性片段长度多态性位点(restrictive fragment length polymorphism,RFLP),i22(GT)n(AG)n是一个较为有用的位点.
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血友病甲患儿及其家系凝血因子Ⅷ基因内含子重复序列多态性研究
目的探索一种更简便,更特异的方法,用于血友病甲的基因诊断及其家系的遗传咨询.方法应用聚合酶链反应(PCR)和双链异源泳动分析(HMA)对我国10个血友病甲患儿及其家系成员中FⅧ基因内13内含子二核苷酸重复序列(CA)n多态性和等位基因进行分析.结果 10个家系中,男性20例,女性10例,共40条X染色体,经PCR扩增、琼脂糖电泳均可显示出140～150 bp DNA条带,男性呈现单一的DNA条带,女性则根据等位基因的不同,出现两条DNA条带(杂合子)或者一条DNA条带(纯合子).结论二核苷酸重复序列广泛分布于中国人群FⅧ基因中,重复序列的多态性作为第二代遗传标志,结合等位基因分析和HMA杂交电泳泳动分析,可明确鉴别出血友病甲基因的携带者,可用于血友病甲的基因诊断和遗传咨询.
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血管性血友病Ⅲ型误诊为血友病A一例
患儿男,15岁,因右足踝肿痛及背部肌肉疼痛于2006年6月入院.患儿出生后3个月因自发性出血及创伤后流血不止,多次诊断为血友病A(因子Ⅷ水平1%).患儿反复出现关节腔出血;并在2岁时并发颅内出血,接受因子Ⅷ浓缩制剂替代治疗.13岁时曾因不明严重血便导致急性重度贫血,血红蛋白降至40 g/L.
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颌面部血友病假性肿瘤的外科治疗
目的 提高对颌面部血友病假性肿瘤的诊断意识并探讨该病的外科治疗方法.方法 回顾5年来4例颌面部血友病假性肿瘤的诊断及治疗过程,并坚持随访2年以上,分析其特点及预后.结果 4例患者治疗前均误诊,并有出血史.1例在无替代疗法下行病灶活检致出血不止；1例无诱因牙龈出血显著,常规止血措施效果不佳,伴出血性贫血.实验室检查4例均存在因子Ⅷ缺乏,确诊为血友病A型.经内科替代治疗后手术治疗,围手术期加强因子Ⅷ活度监测,术后均无严重出血,伤口一期愈合,随访均未见复发.病理检查未见肿瘤细胞,明确血友病假性肿瘤诊断.结论 颌面部血友病假性肿瘤易误诊,可伴有大出血等严重并发症,临床要给予足够的认识,需结合实验室检查及易出血等病史给予确诊,辅以内科替代疗法保障下的手术治疗可以减少出血,防止假性肿瘤进行性增大所致畸形.
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缺氧时肺动脉内皮细胞生长状态的变化
目的研究低氧时内皮细胞生长状态的变化,以揭示缺氧性肺水肿的发生机制. 方法利用体外培养的肺动脉内皮细胞(PAEC),观察了在缺氧条件(3%O2)下,PAEC的生长曲线、细胞周期及细胞内特征性蛋白因子的变化,对PAEC的生长状态进行了质和量综合评价. 结果在观察的48 h范围内,缺氧对PAEC的生长数量无明显影响(P>0.05).细胞的S期在缺氧2 h时出现了一过性的增加,同时G0/G1期出现了一过性的降低(P<0.05).但随着缺氧时间的延长,PAEC的各个生长周期均无明显变化(P>0.05).因子Ⅷ相关抗原(ⅧR:Ag)阳性细胞数在缺氧过程中均呈明显下降(P<0.05或P<0.01). 结论缺氧时,虽然PAEC在生长数量和生长周期上无明显变化,但生长质量出现了明显的下降,这将影响其功能状态,降低血管屏障作用的发挥.
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血管性血友病因子、内皮素-1和血管内皮生长因子在下腔静脉隔膜型布-加综合征中异常表达的意义
目的 探讨血管内皮损伤在下腔静脉隔膜型(MOVC)布-加综合征(BCS)患者隔膜形成过程中的作用.方法 选取MOVC型BCS住院患者40例作为试验组,40例同期住院心律失常患者作为对照组.2组患者均无使用抗凝血(促凝)药物史和吸烟史,无原发性高血压、肺动脉高压、冠心病、心瓣膜病、心肌病、血液病、糖尿病、结缔组织病及恶性肿瘤等疾病,肝、肾功能正常.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组患者下腔静脉血液中血管性血友病因子(vWF)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量.2组患者3种因子的血液浓度值分别采用独立样本t检验进行统计学分析.结果 试验组下腔静脉血液中vWF、ET-1、VEGF 3种因子含量分别为(37.8±6.6) μg/L、(31.9±6.0) ng/L、(20.8±5.8) μg/L,明显高于对照组[分别为 (3.3±1.3) μg/L、(5.3±1.8) ng/L、(4.2±1.2) μg/L],差异有统计学意义(t值分别为32.65、26.70、17.85,P＜0.01).结论 血管内皮损伤与下腔静脉隔膜形成有关.
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FDA批准重组抗血友病因子Kovaltry用于治疗血友病A
FDA批准拜耳公司的抗血友病因子Kovaltry用于治疗血友病A。该药是一种重组的人DNA序列来源的全长因子Ⅷ浓缩物，临时替代因子Ⅷ以有效止血，适用于血友病A（先天性因子Ⅷ缺乏）成年和儿童患者。
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2例小儿颅内恶性肿瘤合并血友病A的围手术期处理
血友病是由于机体缺乏凝血因子而导致的一种遗传性出血性疾病,主要为凝血因子Ⅷ( factor Ⅷ, FⅧ)缺乏的血友病A及凝血因子Ⅸ( factorⅨ,FⅨ)缺乏的血友病B. 随着凝血因子替代治疗的应用,国内外关于血友病患儿手术治疗的报道逐渐增多[1-4]. 神经外科手术本身术中及术后出血风险较高,若合并严重出血性疾病,围手术期风险明显增加. 近年来国外已间断有血友病合并颅内恶性肿瘤手术的报道[5]. 北京大学第一医院小儿外科于2013年9月至2014年3月收治2例颅内恶性肿瘤合并血友病A患儿,均行开颅手术治疗,围手术期平稳,术后顺利出院,现结合文献分析如下.
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血友病A患者因子Ⅷ抑制物的检出率及抑制物产生的环境因素
目的 调查血友病A(HA)患者因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的检出率,初步探讨抑制物产生的环境因素.方法 以2003年4月～2007年4月在北京协和医院就诊的107例HA患者及在院外征集的158例HA患者(共265例)为研究对象,采用一期法检测FⅧ:C活性,Bethesda法检测FⅧ抑制物.结果 265例HA患者中,22例(8.3%)抑制物检测为阳性,其中86.4%(19/22)为低反应者(抑制物滴度≤5000 BU/L),13.6%(3/22)为高反应者(抑制物滴度>5000 BU/L).年龄>50岁患者的抑制物检出率为50%,明显高于其他年龄组(P=0.000).在158例临床治疗资料较完整的新征集患者中,FⅧ制剂输注频率大于12次/年者的抑制物阳性率为12.8%,而输注频率小于12次/年者为5.89b,两组相比差异无统计学意义(P=0.156).有短时间内持续输注FⅧ史者的抑制物阳性率明显高于无持续输注FⅧ史的患者(28.5% vs.1.6%,P=0.000).应用多种品牌和单一品牌FⅧ制剂患者的抑制物阳性率分别为9.3%和3.9%,两组相比差异无统计学意义(P=0.229).结论 HA患者抑制物的生成可能与患者年龄、短时间内持续输注FⅧ史等因素有关.
