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EB 病毒潜伏感染的套细胞淋巴瘤模型研究
目的:建立EBV潜伏感染的套细胞淋巴瘤模型,为淋巴瘤预防与治疗的研究奠定基础.方法:利用新霉素耐性的重组遗传基因EBV(NeoR EBV)和B95-8 EBV对套细胞淋巴瘤细胞株SP49、SP53和Jeko-1进行感染,选出EBV阳性的MCL细胞株,采用免疫荧光法和Southern blot进行鉴定,采用Western blot和流式细胞仪检测EBV阳性的MCL细胞株的免疫表型及生物学活性.结果:成功获得SP49/EBV、SP53/EBV细胞株,均表达EBER1、EBNA2和LMP1,其免疫表型只有CD38表达增强,两细胞株均具有低增殖功能,凋亡抵抗性,成瘤能力下降等特点.结论:本研究建立的SP49/EBV和SP53/EBV细胞株,具有体内EBV潜伏感染的静息B细胞低增殖活性的特征,可成为研究体内EBV潜伏感染的良好模型.
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静息B细胞免疫诱导小鼠心肌移植物存活时间的延长
本文用小鼠耳后心肌移植作为模型观察静息B细胞在诱导延长移植物存活的作用.用C57BL/6新生小鼠的心脏移植给Balb/c成年雌性小鼠的耳后,受鼠在移植前1周事先尾静脉注射C57BL/6静息B细胞,同时观察了用静息B细胞免疫后的Balb/c小鼠脾细胞对C57BL/6小鼠脾细胞的CTL活性.结果显示单独使用静息B细胞免疫组受鼠的同种移植物平均存活时间为(16±1.34)d[空白对照组为(10±1.05)d],单独注射阿霉素组心肌平均存活时间为(14.6±1.74)d,静息B细胞预处理同时配合使用阿霉素组,心肌平均存活时间延长至(27.8±3.96)d(P＜0.001).而活化B细胞组的小鼠排斥反应强烈,在移植后8 d之内全部排斥.静息B细胞免疫鼠对同种细胞的杀伤率,明显低于用活化B细胞免疫的对照组.
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静息B细胞体外诱导同种T细胞低反应的实验研究
本文采用体外同种混合淋巴细胞实验系统观察了静息B细胞(resting B cell)诱导的同种免疫低应答反应.C57BL/6小鼠脾细胞经贴壁去除巨噬细胞后,用抗Thy-1抗体加补体和Percoll非连续密度梯度离心法分离,获得纯化的静息B细胞,经FACS检测其表面高表达SmIg(94.88%)和处于细胞分裂的G0期(95.79%),并表达H-2Kb(99.5%)和H-2I-Ab(82.42%),但低表达CD80/CD86(分别为4.26%和4.16%).C57BL/6小鼠静息B细胞刺激同种BALB/c小鼠T细胞(初次MLR)只呈现微弱增殖反应,明显低于用LPS活化B细胞或全脾细胞刺激时的反应值.作再次MLR实验时,经初次MLR处理的T细胞对C57BL/6小鼠脾细胞表现为很弱的应答反应,但对无关的第三品系AKR鼠脾细胞却呈现强应答,说明这种应答低下具有相对特异性.上述结果提示,静息B细胞在MLR系统中不能诱导同种T细胞的充分活化而表现为同种免疫应答的低下.这在同种移植中诱导受体对移植物耐受提供有益的启示.
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末梢血中EB病毒潜伏感染的静息B细胞模型的建立
目的 应用EB病毒(EBV)感染末梢血CD5+B细胞,建立体内储存EB病毒的静息B细胞模型.方法 应用磁珠技术分离脐胎血中的CD5+B细胞;从新酶素耐性的Atada-EBV细胞中提取EB病毒对CD5+B细胞进行转染制备CD5+B/EBV细胞;流式细胞仪、Western blot法检测CD5+B/EBV细胞的病毒免疫表型和基因表型;免疫荧光双重染色BrdU、Ki67和EBNA2检测CD5+B/EBV细胞增殖活性.结果 流式细胞仪检测显示CD5+B/EBV细胞病毒免疫表型CD20、CD80、CD38和CD86表达增强,CD23没有表达;CD5+B/EBV细胞EBNA2和LMP1病毒相关潜伏感染基因显著增高;免疫荧光染色检测EBNA2阳性的CD5+B/EBV细胞可见BrdU阴性细胞.经因子激活CD5+B/EBV后可见Brdu阴性细胞中有Ki67阳性细胞存在,而在EBNA2阳性细胞中可见Ki67阴性细胞,验证CD5+B/EBV细胞中静息B细胞的存在.结论 本研究建立的CD5+B/EBV细胞具有体内EBV潜伏感染的静息B细胞的特征.
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重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理诱导小鼠皮肤移植物长期存活的研究
目的:研究重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理策略在小鼠诱导建立特异性移植耐受,延长后续进入的供体来源皮肤移植物存活时间的作用.方法:设定空白对照(1组)和第三方空白对照(2组),以AdCD40Ig(3组)、C57BL/6静息B细胞(4组)、AdCD40Ig联合供体静息B细胞(5组)及第三方实验对照(6组)等不同组合在皮肤移植前1周预先处理受体BALB/c小鼠,观察皮肤移植物存活情况.双抗夹心法ELISA测定AdCD40Ig处理后小鼠血清CD40Ig水平.结果:经小鼠尾静脉注入AdCD40Ig 1×109 efu后,于第7天血清CD40Ig水平可达130.6±11.2μg/ml的峰值,第8周后血清CD40Ig内仍有一定水平.皮肤移植实验结果:各组MST(d)分别为:10.33±0.46、9.83±0.53、10.83±0.25、10.00±3.24、63.50±10.45和11.50±3.39.统计处理显示:第5组皮肤移植物MST明显延长,与第3组、第4组和第6组相比具有显著性差异(P＜0.01);而第1组、第2组、第3组、第4组之间无显著性差异.表明仅有AdCD40Ig联合供体静息B细胞预处理可以观察到供体特异性的皮肤移植物长期存活现象.单独使用静息淋巴细胞预处理或者AdCD40Ig,均不能延长皮肤移植物存活时间.结论:AdCD40Ig联合供体静息B细胞预处理策略能在小鼠皮肤移植模型中显著延长后续进入的供体来源皮肤移植物存活时间,是一种具有临床应用前景而值得深入研究的免疫耐受诱导策略.
