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生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究
目的：研制一种生物素-亲和素系统（BAS）介导叶酸受体（FR）靶向量子点（QD）荧光探针，初步验证其靶向性及信号放大效应。方法：采用活泼酯法，将链霉亲和素（SA）与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证；采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸（FA）。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体（FR）靶向QD探针，比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况，并验证其靶向特异性；对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果；比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果：BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞，且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强，同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论：制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针，该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。
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量子点多重染色在卵巢癌体外成像的应用
目的 利用量子点(QDs)免疫荧光技术对卵巢癌SKOV3细胞上叶酸受体(FR)及人附睾蛋白(HE)4 进行定位,初步揭示 QDs多重染色在卵巢癌细胞体外成像的应用价值. 方法 采用活泼酯法,构建不同发射波长的 QDs-链霉亲和素( SA)复合物,分别与生物素化-叶酸( FA)及生物素化-抗HE4抗体结合,形成特异性荧光探针,同时靶向结合SKOV3细胞,实现细胞双重染色. 结果 构建的QD-FA及QD-抗 HE4 抗体靶向探针具有极强的特异性,量子点多重染色的荧光强度与单重染色相比差异无统计学意义(P>0.05). 量子点具有极强的光学稳定性. 结论 量子点多重染色在卵巢癌细胞体外成像中具有一定的应用价值,可为卵巢癌早期检测提供一种新思路.
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链霉亲和素修饰的量子点联合生物素标记的叶酸在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用
目的:探讨链霉亲和素(streptavidin,SA)修饰的量子点(quantum dots,Q Ds)联合生物素标记的叶酸(folic acid,FA)在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用价值.方法:采用活泼酯法合成SA-QDs复合物,并用同样的方法以聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)树状分子为载体合成生物素化FA-PAMAM.采用生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记叶酸受体(folate receptor,FR)高表达的SKOV3细胞,同时以采用游离FA预处理的SKOV3细胞和FR低表达的肺腺癌A549细胞为对照,验证该荧光探针靶向SKOV3细胞的特异性.随后,以未用PAMAM为载体[生物素化FA-聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)联合SA-QDs荧光探针]或无生物素-链霉亲和素放大系统的荧光探针(FA-PAMAM-QDs)为对照,验证该探针的荧光信号双重放大效应.结果:FR高表达的SKOV3细胞可被生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs的荧光探针特异性识别,平均荧光强度高达114.92±2.87,显著高于FA预处理后再用该探针进行检测的SKOV3细胞(57.86±7.59)和FR低表达的肺腺癌A549细胞(14.94±0.83) (P值均＜0.000 1).在双重放大效应的验证实验中,生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的平均荧光强度为120.89±3.80,其荧光强度明显高于生物素化FA-PEG联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的77.50±2.43和FA-PAMAM-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的47.81±1.35 (P值均＜0.000 1).结论:构建获得了一种特异性靶向卵巢癌SKOV3细胞的生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值.
关键词： 卵巢肿瘤 量子点 生物素-链霉亲和素系统 体外成像 -
声诺维超声辐照改善超顺磁性氧化铁纳米粒子对肝癌细胞Hep-G2体外标记效果
目的 探讨声诺维超声辐照改善体外超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)对肝癌细胞Hep-G2标记效果的可行性.方法 7组不同浓度的SPIO在体外与Hep-G2细胞混合,在加入声诺维后采用超声处理1 min,然后监测细胞标记效率、细胞活性和增殖能力.挑选标记效果好,且增殖能力影像小的375μg[Fe]/mL SPIO浓度组,分别以细胞密度为1×102,1×103,1×104,1×105,1×106,及1×107(个细胞/mL),用临床1.5T磁共振进行扫描.结果 实验组中所有7个亚组的标记率都超过90％,两组对照组标记率约为2％.Hep-G2细胞活率随SPIO浓度增加而减低,其在500μg[Fe]/mL、625μg[Fe]/mL、750μg[Fe]/mL和875μg[Fe]/mL的活率分别为59.7％±7％、47.76％±9％、46.27％±10％和43.28％±7％,提示当SPIO浓度达到或大于500 μg[Fe]/mL时对Hep-G2细胞具有明显毒性,但其增殖活性并无明显差异.体外磁共振扫描结果显示T2W1序列信号减低,能敏感显示SPIO浓度的变化;其信号强度与细胞浓度呈负相关(P＜0.05).结论 声诺维超声辐照确实能改善体外SPIO对肝癌细胞Hep-G2的标记效率,MRI可切实、敏感地对其进行检测.
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量子点在生物医学领域应用的研究进展
在生物医学领域中,人们对生命现象的观察和研究已经深入到单细胞、单分子水平.因此提高生命过程中蛋白质、核酸、多肽等重要生物分子检测的灵敏度已成为研究者努力的方向.荧光分析法是生命科学研究中十分重要的方法之一,其检测灵敏度很大程度上取决于标记物的发光强度和光化学稳定性.
