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过表达P27Kip1对胃癌细胞P27蛋白及其磷酸化产物表达分布的影响
目的:研究胃癌BGC823细胞系中过表达P27蛋白时,P27及其磷酸化蛋白在细胞中的分布.方法:将外源性P27KIP1基因转染人胃癌细胞系BGC823,应用流式细胞分析术检测转染组和对照组的细胞周期和细胞凋亡,采用Western blot和免疫荧光方法,检测P27蛋白和磷酸化P27蛋白(p-P27)在二组细胞中的表达和分布.结果:转染组细胞G1期细胞数较对照组明显增加(62.783%vs.41.933%,P<0.001);转染组细胞凋亡指数(AI)显著高于对照组(26.3 vs.3.6,P<0.001).转染组P27蛋白和p-P27表达均高于对照组.对照组P27蛋白主要在胞核内表达,p-P27主要在胞浆内表达;转染组P27蛋白主要在胞核内分布,p-P27蛋白在胞浆、胞核内均有分布表达,但主要分布在胞核内.结论:P27蛋白过表达能够使细胞周期停滞于G1期,诱导细胞凋亡.推测胞核内P27蛋白水平和p-P27的核浆比值可能是评价肿瘤增殖活性的重要指标.
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PI3K信号通路对胃癌细胞P27磷酸化蛋白分布表达的影响
目的:研究PI3K信号通路对胃癌BGC-823细胞中P27与磷酸化P27(p-P27)蛋白表达分布的影响.方法:LY294002处理BGC-823细胞,流式细胞术测定处理前后两组细胞周期分布.Western blotting测定两组细胞总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中P27与p-P27(Thr187、Thr157及Ser10)蛋白含量及分布特点.结果:处理后G1期细胞数明显增加(83.9% vs.67.6%,P<0.01).P27在总蛋白、胞浆蛋白和核蛋白中表达均显著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01);p-P27(Ser10)在总蛋白、胞浆蛋白和核蛋白中表达均显著下降(P<0.01,P<0.01,P<0.01);p-P27(Thr157)在总蛋白、胞浆蛋白中表达均显著下降(P<0.01,P<0.01),在核蛋白中下降不明显(P=0.482);p-P27(Thr187)在总蛋白、胞浆蛋白中表达均下降,在核蛋白中表达增高,均无显著性差异(P=0.254,P=0.70,P=0.223).结论:阻断PI3K通路可增加胃癌细胞P27蛋白表达,降低p-P27蛋白表达,改变P27和p-P27蛋白的核浆分布,可以使细胞周期停滞于G1期,诱导细胞凋亡.
