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乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究
恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的疾病.目前,将多种目的基因融合后行肿瘤基因治疗已为众多学者所关注.将胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和内皮抑素(ES)基因融合成重组腺病毒rAdCDES,并观察其在体内外对乳腺癌细胞生长抑制作用,以期为乳腺癌的基因治疗提供新的研究方向.
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rAdCDES的构建及对人肿瘤细胞抑制作用
目的:构建一种对肿瘤有直接和间接治疗作用的重组腺病毒rAdCDES.在体外进行抑瘤实验研究.方法:用PCR法扩增CD和glyES基因片段,插入腺病毒穿梭质粒.用细菌内同源重组法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒,经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAdCDES.用MTT法检测其对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株SMMC-7 721和人肺腺癌细胞株A549的生长抑制情况.结果:成功构建了rAdCDES,其病毒滴度为1×1 010.3TCID50/ml;rAdCDES在体外对人的MCF-7、A549、SMMC-7 721 3种肿瘤细胞有明显抑制作用,与对照rAdLacZ(19.2±7.8)%相比较有显著性差异(P<0.01).结论:rAdCDES在体外对肿瘤细胞有明显的抑制作用,为其用于基因治疗奠定了基础.
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腺病毒介导CDES融合基因对乳腺癌细胞的抑制作用
目的:构建一种重组腺病毒rAdCDES,在体内外进行抑瘤和放疗增敏作用实验研究.方法:用细菌内同源重组法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒,经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAdCDES.用测定生长曲线和MTT法检测其对人乳腺癌细胞株MCF-7的生长抑制情况;建立津白号鼠乳腺癌模型,观察rAdCDES和放疗对瘤体大小及鼠存活期的影响.结果:成功构建了rAdCDES;rAdCDES对MCF-7细胞生长抑制率达(83.1±8.1)%,与对照rAdLacZ(19.2±7.8)%相比较有显著性差异(P＜0.01);体内rAdCDES对小鼠乳腺癌MA737细胞有明显生长抑制作用,延长了小鼠的存活期,且对放疗有肯定的增敏作用.结论:本文所构建的rAdCDES在体内外对乳腺癌细胞均有明显的抑制作用和对放疗的增敏作用.
