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HPLC法测定灵芝子实体和孢子粉中灵芝酸C2、灵芝酸G和灵芝酸A
目的 建立灵芝子实体和孢子粉中3种灵芝酸类成分的HPLC测定方法,为全面评价灵芝药材和孢子粉的质量提供依据.方法 采用HPLC方法测定,Diamonsil(钻石)C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-0.03％磷酸(28∶72),体积流量1.2 mL/min,检测波长250 nm;柱温35℃.结果 灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝酸A分别在0.40～10.06 μg(r=0.999 99)、0.40～10.00 μg (r=0.999 99)、0.40～10.00 μg(r=0.999 99)线性关系良好,平均回收率分别为101.04％、99.39％、101.22％,RSD值分别为1.64％、1.86％、2.20％(n=6):灵芝子实体中3种灵芝酸的质量分数分别在0.06～0.29 mg/g、0.12～0.37 mg/g、0.19～0.41 mg/g,灵芝孢子粉供试品中3种灵芝酸的质量分数分别在0～0.01 mg/g、0、0～0.03 mg/g.结论 本方法简便,稳定,可用于灵芝三萜类成分C2、灵芝酸G、灵芝酸A的定量分析.
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灵芝酸G对FcεRIα+肥大细胞的活性影响
目的 研究灵芝酸G诱导小鼠肥大细胞活化及细胞因子分泌.方法 流式细胞仪检测细胞表面CD117+ FcεRIα+分子的表达;比色法测定小鼠肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放,OPT法检测组胺释放.ELISA法检测IL-10和TNF-α的分泌.结果 灵芝酸G能诱导小鼠肥大细胞97.18％的CD117+ FcεRIα+分子表达;体外实验显示2μg/ml灵芝酸G可以诱导小鼠肥大细胞组胺释放率为72.0％,β-氨基己糖苷酶释放率为32.2％,并分泌IL-6和TNF-α.结论 灵芝酸G能诱导小鼠肥大细胞脱颗粒并分泌细胞因子,同时抑制炎性反应.
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SEA依赖的灵芝酸G诱导Vβ3+CD8+T细胞抗肿瘤活性的研究
目的 探讨葡萄球菌肠毒素A(SEA)依赖的灵芝酸G对小鼠CD8+细胞活化及杀伤肿瘤细胞的作用.方法 流式细胞技术分别检测CD8+细胞表面分子表达及活化后细胞内的颗粒酶(GrB)和穿孔素(PF)的水平;Caspase-3分析肿瘤细胞凋亡.结果 SEA依赖的灵芝酸G经过3 d刺激能激活小鼠CD8+细胞表面分子Vβ3和Vβ11;体外实验显示,SEA1 ng/mL和灵芝酸G 1μg/mL可以诱导小鼠CD8+细胞释放91.6%GrB和86.4%PF;SEA依赖的灵芝酸G诱导HL-60和A20细胞内Caspase-3活性分别为68.8%和54.1%.结论 SEA依赖的灵芝酸G能促使小鼠Vβ3+CD8+T细胞活化产生大量的GrB和PF,并通过Caspase-3的信号途径诱导肿瘤细胞凋亡.
