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柱切换HPLC技术在生物样品测定中的应用
作为一种现代分析技术,高效液相色谱法的应用已越来越广泛.其中,高效液相色谱-高效液相色谱联用技术(柱切换,columnswitchingtechnique),自20世纪70年代问世以来,经过逾30年的发展,以其样品预处理简单,样品用量少,可对样品在线净化、富集等优点,已被越来越多的分析工作者所重视,并广泛应用于环境保护、农药残留监测、食品检验、生化分析、体内药物分析等众多领域.
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流动注射氢化物发生原子吸收光谱法测定发砷
近年来砷的测定方法报道较多[1～4],其中流动注射氢化物发生原子吸收光谱法具有灵敏度高、选择性好、分析快速、试剂和样品用量少及操作方便等优点,已应用于水、地矿样品及土壤中砷的测定,但少见用于生物样品测定.本文在文献[2]的基础上,建立发中砷的流动注射氢化物发生原子吸收光谱法,对各种测试条件进行比较,并采用紫外消化技术处理样品,获得较好效果.
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用铁(Ⅱ)-1,10-邻菲啰啉-大黄素体系的共振瑞利散射光谱法测定生物样品中大黄素
目的:建立共振瑞利散射法测定大黄素的含量.方法:在pH7.3的B-R缓冲溶液中,铁(Ⅱ)与1,10-邻菲啰啉形成稳定的1∶3的配合物,再与大黄素(EMO)结合形成1∶2的离子缔合物.铁(Ⅱ)-1,10-邻菲啰啉溶液:称取0.278 0 g FeSO4·7H20溶于70 mL水中,加入邻菲啰啉(1,10-phen)0.595 0 g,加入适量的抗坏血酸,稀释至100 mL,得到1×10-2 mol·L-1的储备液,用时稀释成2.0 ×10-3 mol·L-1的工作液.室温下,于10 mL比色管中依次加入pH7.3的B-R缓冲溶液2 mL,适量的EMO标准溶液,以及2.0×10-3mol·L-1Fe(phen)]+溶液1.2 mL.每加一种试剂后混合均匀,用二次蒸馏水定容至刻度,摇匀,静置10 min后,在荧光分光光度计上以λex=λem方式进行同步扫描,记录共振瑞利散射(RRS)光谱,以λem=2λex和λem=1/2λex进行扫描,分别测量不同入射波长(λex)下的散射强度ISOS和IFDS,然后分别以ISOS和IFDS对应的波长作图,得到二级散射(SOS)光谱和倍频散射(FDS)光谱.分别在各自的大散射波长处测量样品和试剂空白的散射强度IRRS,ISOS,IFDS及I0RRS,I0SOS,I0FDS,△I=I-I0.结果:体系的RRS、SOS和FDS显著增强并出现新的散射峰,相应的大散射峰分别位于349、684和351 nm.EMO的质量浓度在0.8～10.4 μg·mL-1时,与RRS、SOS和FDS的散射强度呈良好的线性关系,其检出限(3σ)依次分别为10.1、32.8、28.6 ng· mL-1.血样和尿样(各3批)中测定EMO的回收率分别在94.9％ ～ 102.4％和99.4％～102.7％之间,RSD分别在1.5％～3.1％和1.1％ ～ 3.0％之间.将本法与紫外可见分光光度法比较,结果满意.结论:经方法学验证,体系的共振瑞利散射方法可用于尿样和血清中大黄素的测定.
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LC-MS/MS法测定血浆中米非司酮及低剂量人体药代动力学研究
目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中米非司酮浓度,并对口服10 mg米非司酮片后的药代动力学进行研究.方法:血浆样品以他达那非为内标,经乙腈沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析.采用高效液相色谱分离系统,色谱柱为SunFire C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为10 mmoL·L-醋酸铵溶液-乙腈-甲酸(20∶80∶0.2);采用质谱检测系统,ESI离子源,正离子模式,多反应监测(MRM)方式监测m/z 430→m/z 372(米非司酮)和m/z 390→m/z 268(内标他达那非).结果:米非司酮质量浓度在1.0～1000.0 ng·mL-1范围内与色谱响应相关性良好,定量下限为1.0 ng·mL 1.批内及批间精密度RSD均小于9％,准确度在91.0％ ～ 107.6％.20名受试者单次服用10 mg米非司酮片后AUC0-96h为(4 198.2±1792.8)ng·mL-1·h,AUC0-∞为(4 384.2±1 880.1)ng·mL-1·h,Cmax为(476.4±223.1)ng·mL-1,tmax为(1.04 ±0.80)h,t1/2为(20.61 ±6.50)h,MRT为(21.46 ±4.32)h,CL为(2.7±1.1)L·h-1,Vd为(75.9±28.0)L.结论:本测定方法灵敏准确,简便易行,适用于服用低剂量米非司酮后血药浓度的测定及其药代动力学研究.研究结果显示米非司酮片口服后吸收较快,1h左右达峰值;受试者用药后无不良事件发生,安全性较高.
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高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中硫辛酸
目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中硫辛酸浓度,并对口服0.2g硫辛酸分散片后的药代动力学进行研究.方法:血浆样品以萘普生为内标,经乙腈沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析.采用高效液相分离系统,色谱柱为Venuseil XPB C18柱(150mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-10 mmol·L-1醋酸铵-甲酸(80∶20∶0.2);采用质谱检测系统,ESI离子源,负离子模式,多反应监测(M RM)方式监测m/z 205→m/z 171(硫辛酸)和m/z229→m/z 170(萘普生,内标).结果:建立的LC-MS/MS法在2.500 ～5 000 ng·mL-1质量浓度范围内,硫辛酸色谱响应与质量浓度相关性良好,定量下限为2.500 ng·mL-1;批内及批间精密度RSD均小于7％,准确度在96.5％～101.6％.12名受试者单次服用0.2g硫辛酸分散片后AUC0-t为(1 816 ±885.6)ng·mL-1·h,AUC0-∞为(1 837±879.6)ng·mL-1·h,Cmax为(3 432±2 410) ng·mL-1,tmax为(0.45 ±0.44)h,t1/2为(0.45 ±0.18)h,MRT为(0.73 ±0.31)h,CL为(133.2 ±66.63)L·h-1,Vd为(85.60±50.98)L.结论:本测定方法灵敏准确,适用于人血浆中硫辛酸浓度的测定及其药代动力学研究.
