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RNAi缄默小鼠树突状细胞CD80、CD86表达诱导T细胞无能的体外研究
目的:探讨RNAi对DC表面抗原CD80、CD86表达的缄默作用及siRNA干扰后树突状细胞(DC)诱导T淋巴细胞无能的机制.方法:体外转录合成针对CD80、CD86 mRNA序列特异性siRNA;半定量RT-PCR、流式细胞仪检测转染前后DC中CD80、CD86 mRNA表达水平以及细胞表面抗原CD80、CD86表达情况;混合淋巴细胞培养观察siRNA干扰对DC刺激T淋巴细胞增殖能力的影响,并以半定量RT-PCR测定混合淋巴细胞培养反应体系中IL-2、IFNγ、IL-10 mRNA表达水平.结果:siRNA转染DC后,CD80、CD86 mRNA表达水平明显减低,细胞表面抗原CD80、CD86阳性率由84%、67%下降至35%、30%;混合淋巴细胞培养结果显示,siRNA干扰后DC对T淋巴细胞刺激指数明显下降(P＜0.01),且反应体系中IL-2、IFNγ mRNA表达水平明显降低(P＜0.01),同时IL-10 mRNA表达水平增高.结论:RNAi可高效、特异地抑制CD80、CD86表达.经RNAi敲减后DC激活异系淋巴细胞的能力降低,合成、分泌IL-2能力下降,并诱使Th细胞分化方向发生免疫偏离,诱导T细胞无能.
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T细胞无能与凋亡关系初探
目的:探讨无能T细胞与凋亡的关系.方法:利用B7-1单抗和环孢素A(CsA)联用处理APC即T细胞系统,在体外诱致抗原特异性T细胞无能,用PI染色法经FACS分析了无能T细胞的凋亡,用RT-PCR法检测了凋亡细胞Fas mRNA的表达水平.结果:无能T细胞在1、3、5、10 d细胞凋亡的百分率依次为2.16%、11.28%、19.27%、41.22%.当加入100 U/ml IL-2维持培养,无能T细胞未显示明显凋亡.无能T细胞活化后经PHA、PMA+A23187、CD3单抗再次诱导,24 h便发生明显凋亡,凋亡百分率分别为34.64%、21.27%、15.07%,活化后的T细胞及无能T细胞凋亡时Fas mRNA上调表达.结论:无能T细胞在体外是逐渐发生凋亡的,Fas/FasL参与细胞凋亡过程.
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未经刺激的静止CD4+T细胞与克隆CD4+T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义
在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议.由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难.本文利用HNT-TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4+T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4+T细胞和新提取未经刺激的CD4+T细胞对无能诱导的反应.结果表明,经化学交联剂1-ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4+T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4+T细胞则不能被诱导产生无能.结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件.这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义.
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Cbl-b调控T细胞的免疫耐受
免疫系统是一个复杂的有机整体,作为调控免疫耐受的分子之一,Cbl-b主要通过诱导T细胞无能与调控性T细胞来负调控免疫作用.本综述旨在阐述Cbl-b负调控免疫作用的具体机制,以及其自身的表达调控机制,以此找到一个新颖且重要的疾病治疗方向.
