您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
PR结构域文献资料
-
PR结构域真核表达载体的构建
目的:构建能够稳定克隆、表达RIZ1基因中PR结构域的真核表达载体.方法:首先用RT-PCR方法从人食管组织中提取mRNA,逆转录为cDNA,利用cDNA模版扩增出PR结构域,连入T载体.然后提取PR结构域及pcDNA3.1(+)质粒,酶切后连接,转入Trans-T感受态细胞中.结果:提取pcDNA3.1/PR结构域质粒,琼脂糖凝胶电泳,可见大于5000bp的目的条带,与预测结果一致,测序结果正确.结论:构建PR结构域真核表达载体成功,为进一步实验研究PR结构域在食管癌细胞中的表达与功能奠定了基础.
-
含RIZ1 PR结构域融合蛋白的原核表达、提纯与功能分析
目的:表达与提纯RIZ1第1个至第200个氨基酸含PR结构域的活性GST融合蛋白质(GST-PR200融合蛋白).方法:设计引物以含人RIZ1 cDNA全序列的pRIZ1 RH质粒为模板克隆获得目的基因片段,测序核对后经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pGEX-6P-3中,经转染与IPTG诱导表达筛选到阳性大肠杆菌克隆并提纯该融合蛋白质.分别采用SDS-PAGE蛋白电泳法、质谱分析法及组蛋白甲基化转移酶(HMT)测定法鉴定其性质与功能.结果:获得的纯化融合蛋白质相对分子质量约为47 000,其CPM值明显高于对照组(P<0.01),且与作用时间呈正相关.结论:所构建的融合蛋白原核表达系统能有效表达活性GST-PR200融合蛋白,可供大量提取作进一步研究.
