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PR结构域真核表达载体的构建
目的:构建能够稳定克隆、表达RIZ1基因中PR结构域的真核表达载体.方法:首先用RT-PCR方法从人食管组织中提取mRNA,逆转录为cDNA,利用cDNA模版扩增出PR结构域,连入T载体.然后提取PR结构域及pcDNA3.1(+)质粒,酶切后连接,转入Trans-T感受态细胞中.结果:提取pcDNA3.1/PR结构域质粒,琼脂糖凝胶电泳,可见大于5000bp的目的条带,与预测结果一致,测序结果正确.结论:构建PR结构域真核表达载体成功,为进一步实验研究PR结构域在食管癌细胞中的表达与功能奠定了基础.
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RIZ1蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理参数及放疗敏感性的相关性研究
目的 探讨宫颈鳞状细胞癌组织中Rb蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)的表达及其与宫颈癌患者临床病理参数及放疗敏感性的关系.方法 采用免疫组化法观察RIZ1在159例宫颈鳞癌(Ⅱb、Ⅲa期)患者及20例正常宫颈组织中的表达情况,分析RIZ1在宫颈鳞癌组织中不同组间的差异表达情况,及其与宫颈癌放疗敏感性的相关性.结果 与正常宫颈组织相比,RIZ1蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显下降(P<0.001);RIZ1蛋白的表达水平与宫颈癌的放疗敏感性密切相关(P=0.012),并与FIGO分期(P=0.004)、深肌层浸润(P=0.026)、盆腔淋巴结转移(P=0.021)以及放疗后复发(P=0.005)密切相关,Logistic回归结果提示RIZ1蛋白高表达是宫颈癌放疗敏感性的独立预测因素(P=0.045).结论 RIZ1可能参与宫颈鳞癌的发生与发展过程,并可能成为评估宫颈鳞癌放疗敏感性的候选标志物.
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RIZ1表达对髓性白血病细胞株凋亡的影响
背景与目的:RIZ1是近年来发现的抑癌基因,在多种实体瘤如乳腺癌、肝癌和胃癌中RIZI均表达下降或无表达.本研究探讨了RIZ1转录对髓性白血病细胞凋亡的作用.方法:采用RT-PCR法检测5种髓性白血病细胞株即AML193、KG-1、KG-1a、K562、Ery-1中RIZ1 mRNA转录状况.将含RIZ1全长cDNA的重组质粒pRIZ1RH转入该基因表达缺乏的细胞株中,以制备强制性基因表达细胞模型.细胞株导入单纯载体(pcDNA3.1)作为对照.于基因导入后24 h应用FCM细胞凋亡率.结果:该5种细胞株中,AML193与K562呈RIZ1 mRNA无转录或低转录,但导入pRIZ1 RH 24 h后则出现转录或转录明显增加,且测得该两细胞株凋亡率分别为(22.7±0.7)%、(28.6±1.2)%,均高于相应对照组[分别为(11.7±1.6)%、(9.O±0.8)%],差异均有显著性(P＜0.01).结论:RIZ1的转录能够诱导AML193和K562髓性白血病细胞株凋亡,提示该基因可作为其失活的髓性白血病患者之基因疗法的重要靶分子.
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RIZ1在胶质瘤中的表达及其与预后的相关性
目的 研究视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指蛋白1(RIZ1)在不同级别脑胶质瘤组织中的蛋白表达水平以及其对患者预后的影响.方法 应用免疫组织化学染色检测RIZ1和Ki-67在51例不同级别星型胶质细胞瘤中的蛋白表达情况.利用统计学方法分析RIZ1表达水平与患者临床病理学特征和预后的相关性.结果 免疫组化染色显示RIZ1蛋白表达主要分布在细胞质,而Ki-67蛋白主要位于细胞核;低级别胶质瘤中RIZ1的表达[(48.83±4.34)％]高于高级别胶质瘤[(7.55±4.39)％],差异有统计学意义(P＜0.000 1);RIZ1与Ki-67的表达负相关(r=-0.813 0,P＜0.000 1).Kruskal-Wallis检验结果显示RIZ1的表达与肿瘤级别和患者年龄负相关(P＜0.05),Kaplan-Meier生存分析显示RIZ1的表达与患者无进展生存期和总生存期正相关(均P＜0.000 1);单因素分析提示RIZ1高表达和Ki-67低表达的患者预后较好,将单因素分析结果中P＜0.2的因素纳入多因素Cox回归分析发现,RIZ1的高表达是胶质瘤患者预后的保护因素(P=0.000,HR=0.164,95％CI:0.071～0.378).结论 RIZ1的表达随着胶质瘤病理级别的增高而降低,并与患者的预后明显相关,RIZ1可以作为胶质瘤治疗和判断预后的生物学依据.
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乳腺癌中RIZ1的表达及其临床意义初探
目的研究RIZ1基因mRNA表达的改变与乳腺癌发生及与患者相关临床和病理特征之间的关系.方法采用半定量RT-PCR方法检测34例乳腺癌标本及相应癌旁组织、15例乳腺良性肿瘤RIZ1基因mRNA的表达状况,并结合相关指标进行分析.结果 RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达明显低于癌旁乳腺组织与乳腺良性肿瘤组织,差异均有显著性(均P<0.05).RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达与年龄、肿瘤TNM分期、淋巴结转移、激素受体(ER)状况无相关关系(均P>0.05).结论:RIZ1基因mRNA表达降低可能与乳腺癌的发生相关.
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卵巢浆液性腺癌BRMS1、RIZ1和SATB1蛋白表达及其与预后的关系
目的 探讨卵巢低、高级别浆液性腺癌中BRMS1、RIZ1和SATB1蛋白表达及其临床病理意义.方法 应用免疫组化EliVision法检测卵巢低、高级别浆液性腺癌组织中BRMS1、RIZ1和SATB1蛋白的表达,对比分析三者在不同级别浆液性腺癌中的表达规律,并应用Kaplan-Meier单因素统计法分析三者与不同级别浆液性腺癌患者预后的关系.结果 BRMS1、RIZ1和SATB1蛋白在高级别组中的阳性率分别为43.9％、46.3％和51.2％;与对照组相比,BRMS1、RIZ1的表达明显降低,而SATB1明显升高(P＜0.05).低级别组中三者的阳性率分别为30.0％、35.0％和75.0％;交界性囊腺瘤中分别为55.6％、50.0％和55.6％;与对照组和囊腺瘤组比较,BRMS1、RIZ1的表达明显降低,而SATB1明显升高(P＜0.05).BRMS1、RIZ1和SATB1在低、高级别浆液性腺癌中的表达差异无显著性(P＞0.05).Kaplan-Meier单因素统计分析结果显示,高级别组BRMS1和RIZ1阳性患者3、5年生存率明显高于阴性患者,而SATB1阳性患者生存率明显低于阴性患者(P＜0.05).低级别组中二者未见明显差异(P＞0.05).结论 BRMS1和RIZ1表达降低,SATB1表达升高,它们既参与了高级别浆液性腺癌,也参与了低级别浆液性腺癌的发生,提示不同级别浆液性腺癌的发生仍然存在一些相同的分子改变.三者表达与高级别浆液性腺癌的预后有关,而与低级别浆液性腺癌无关.
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MicroRNA-153对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响
目的 探讨microRNA-153对(miR-153)对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响及其作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测放疗前后脑膜瘤SF3061细胞系中miR-153的表达变化,用脂质体转染技术将miR-153 mimics及对照转染至SF3061细胞中,采用MTT法、流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放疗敏感性变化.使用TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指1(RIZ1)的靶向作用,基因敲除RIZ1验证其对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响.结果 脑膜瘤细胞经过放疗处理后miR-153的表达水平降低;miR-153 mimics提高放疗后细胞的增殖抑制率和凋亡率,降低细胞克隆形成率;TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验证实RIZ1是miR-153的靶标;转染si-RIZ1增加脑膜瘤细胞的放疗敏感性.结论 miR-153通过靶向干扰RIZ1的表达,增加脑膜瘤细胞的放疗敏感性.
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抑癌基因RIZ1与妇科恶性肿瘤关系的研究进展
临床常见的妇科三大恶性肿瘤宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌，其发生机制与多种癌基因的激活、抑癌基因的失活以及外源刺激因素等有关，其中一个很重要的因素是抑癌基因的失活。RIZ1基因为近几年新发现的肿瘤抑制基因，属于核组蛋白甲基转移酶超家族。RIZ1基因表达沉默存在于人类多种肿瘤细胞中。大量研究证实：DNA启动子甲基化是导致RIZ1基因表达沉默的主要原因，去甲基化可以使RIZ1重新表达，进而抑制肿瘤细胞的生长促进其凋亡。
