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杞黄颗粒对实验性脉络膜新生血管VEGF蛋白及其mRNA表达的影响
[目的]探讨杞黄颗粒对激光诱导脉络膜新生血管(CNV)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及其mRNA表达的影响.[方法]81只雄性棕色挪威(BN)大鼠,采用随机分组 法,13只为空白 对 照 组;68只造模,随机抽取3只验证CNV形成,剩余65只随机分为5组:杞黄颗粒A组(简称杞黄A组),杞黄颗粒B组(简称杞黄B组),雷珠单抗组,杞黄颗粒+雷珠单抗组(简称杞黄+雷珠组),模 型 组.除杞黄B组 给药90 d,其余组 给药60 d后检测VEGF蛋白 含量和mRNA表达水平.[结果]造模 第7天,CNV验证形成.用药60 d,杞黄+雷珠组 与杞黄A组、模 型 组 相比VEGF的蛋白 含量也明显降低,均P<0.05,具有统计学差异.杞黄B组 与杞黄A组 相比,VEGF蛋白 含量降低降低, P<0.05,具有统计学意义.用药60 d,空白 对 照 组 相比模 型 组,杞黄+雷珠组 相比模 型 组 VEGF mRNA均有明显降低, P<0.05,具有统计学差异;杞黄B组 相比杞黄A组 的VEGF mRNA降低明显,P<0.05,具有统计学意义.[结论]杞黄颗粒与雷珠单抗联合使用,对 于VEGF的表达有明显的调节作用,能够减少CNV的形成,对 湿性老年性黄斑变性(WAMD)有一定治疗意义.
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杞黄颗粒对肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性临床证候的影响
[目的]观察杞黄颗粒治疗肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性的临床疗效.[方法]肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性干性、湿性患者共120例,随机分为杞黄颗粒治疗组62例、维生素C对照组58例,观察治疗前后视力及中医证候评分变化.[结果]视力方面:对年龄相关性黄斑变性(AMD)患者治疗组与对照组治疗前后的总体视力进行组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);对AMD患者治疗组与对照组治疗前后的总体视力进行组内比较,差异有统计学意义(P<0.05);杞黄颗粒治疗组显效24例,有效36例,无效2例,总有效率为96.77%.维生素C对照组显效4例,有效31例,无效23例,总有效率为60.35%.治疗组中医证候的改善明显优于对照组,经秩和检验,两组治疗前后对比差异有统计学意义(P<0.05).杞黄颗粒治疗组内干性共45例,显效19例,有效24例,无效2例,总有效率为95.56%;湿性共17例,显效5例,有效12例,无效0例,总有效率为100%.经秩和检验,干性与湿性对比结果差异无统计学意义(P>0.05).[结论]杞黄颗粒和维生素C对肝肾阴虚型AMD患者的视力均有一定的改善作用;杞黄颗粒对AMD患者的中医证候改善作用明显,具有良好的临床疗效.
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杞黄颗粒对肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性视力及眼底情况的影响
目的:探讨杞黄颗粒对年龄相关性黄斑变性(AMD)患者视力及眼底情况,如色素上皮脱失情况、玻璃膜疣、新生血管及出血量的影响.方法:采用随机平行对照研究,将2010年6月—2014年6月在广东省中医院眼科及天津中医药大学第一附属医院眼科就诊的肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性患者随机分为实验组及对照组.终入组120例患者,治疗组62例,予以杞黄颗粒口服;对照组58例,予以维生素C口服.治疗前后均对患者双眼视力及眼底情况进行记录,经过14周服药后,采用t检验和卡方检验对数据进行组间及组内的对比.结果:治疗前后两组组间患者总体视力差异无统计学意义(P＞0.05),治疗前后两组组内对比有差异(P＜0.05);干性AMD治疗前后视力的组间比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05),干性AMD治疗前后视力的组内比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);湿性AMD治疗前后视力的组间比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05),湿性AMD治疗前后视力的组内比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);干性AMD患者的眼底色素上皮及玻璃膜疣治疗前,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),治疗后两组组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),治疗前后两组组内对比,差异有统计学意义(P＜0.05);湿性AMD患者的的眼底出血及新生血管治疗前后,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),治疗前后两组组内对比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:杞黄颗粒和维生素C对肝肾阴虚型年龄相关性黄斑变性的总体视力均有改善作用,且两者疗效相当;杞黄颗粒和维生素C对于干性AMD或湿性AMD患者的视力均有一定的改善作用;杞黄颗粒和维生素C均可改善干性AMD及湿性AMD患者的眼底情况,对于干性AMD患者眼底色素上皮及玻璃膜疣改善情况,两者疗效有差异,对于湿性AMD患者眼底出血及新生血管眼底改善情况,两者疗效相当;对于个别指标治疗前组间对比存在差异,考虑因患者个体差异所致,仍符合随机分组原则,对实验结果无影响.
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杞黄颗粒中挥发油提取和β-CD包合工艺的研究
目的 考察杞黄颗粒中挥发油的佳提取工艺和β-CD佳包合工艺.方法 采用单因素以收油率作为评价提取工艺的指标;以包合物收得率和挥发油包合率的综合评分作为评价包合工艺的指标优选β-CD包合工艺.结果 挥发油佳提取工艺为:莪术加水6倍量,浸泡12 h,提取6 h;挥发油的佳包合工艺为采用饱和水溶液法在一般温度下β-CD与挥发油的配比为6:1,水与挥发油的配比为60:1,包合时间为45 min.结论 所选提取工艺提取率高,包合工艺合理可行.
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高效液相色谱-蒸发光散射测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量
目的 制定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法.方法 用HPLC-ELSD法,Shim-pack C18-ODS色谱柱,流动相乙腈-水(32∶68),流速1.0 ml/min;ELSD参数:漂移管温度40 ℃,气流压强:4.1Bar.结果 回归方程为Y=1.614X+4.257 7,r=0.999 6,线性范围为2.036～7.635 μg.回收率为97.55%,RSD为2.02%.结论 本研究建立的方法简便、可靠、准确,可以作为杞黄颗粒的质量控制方法.
关键词： 杞黄颗粒 高效液相色谱-蒸发光散射 黄芪甲苷 -
杞黄颗粒对实验性脉络膜新生血管中HIF-1蛋白含量及基因表达的干预研究
目的:通过缺氧诱导因子 (HIF-1) 蛋白含量及基因的表达探讨杞黄颗粒对脉络膜新生血管 (CNV) 发生发展过程的作用机制.方法:健康雄性BN大鼠81只, 随机选取13只作为空白对照组, 另68只右眼通过激光光凝方式建立CNV模型.光凝7d后随机选取3只检验造模是否成功, 余下65只随机分为5组:模型对照组、杞黄颗粒A组、杞黄颗粒B组、雷珠单抗组、杞黄颗粒+雷珠单抗组, 各13只.治疗结束后, 除杞黄颗粒B组在治疗的第90天处死, 其余组大鼠均在治疗的第60天心脏灌注处死, 取右眼制作标本, 采用Western-blotting和RT-PCR检测HIF-1的蛋白含量及mRNA表达.结果:模型大鼠于激光后第7天OCT检查可见视网膜色素上皮复合层不连续, 局部增厚, 反射增强, 界限不清, 眼底荧光血管造影检查显示出少量圆盘状荧光渗漏, 表明造模成功.与空白对照组比较, 模型对照组HIF-1蛋白和其mRNA的表达趋势一致, 均有上调, 差异有统计学意义 (P＜0.05) .HIF-1蛋白表达量, 模型对照组明显高于杞黄颗粒+雷珠单抗组, 差异有统计学意义 (P＜0.01);杞黄颗粒A组、雷珠单抗组、模型对照组组间比较, 差异均无统计学意义 (P＞0.05);杞黄颗粒B组与A组比较, 差异有统计学意义 (P＜0.05) .HIF-1mRNA表达, 模型对照组明显高于雷珠单抗组、杞黄颗粒+雷珠单抗组, 杞黄颗粒A组表达高于雷珠单抗组和杞黄颗粒+雷珠单抗组, 差异均有统计学意义 (P＜0.05);杞黄颗粒+雷珠单抗组优于雷珠单抗组, 但差异无统计学意义 (P＞0.05);杞黄颗粒B组与A组比较, 差异有统计学意义 (P＜0.05) .结论:杞黄颗粒联合雷珠单抗在抑制CNV中下调HIF-1蛋白含量及基因表达效果较单纯应用杞黄颗粒更加稳定, 长期应用杞黄颗粒对抑制CNV有临床意义, 其作用机制可能与下调HIF-1因子有关.
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杞黄颗粒对年龄相关性黄斑变性患者血清补体的调控作用
目的 探讨杞黄颗粒对年龄相关性黄斑变性(AMD)患者血清补体因子H(CFH)及C5b-9的调控作用.方法 采用临床随机对照试验研究设计方法,将AMD患者随机分为观察组(62例)和对照组(58例).观察组口服杞黄颗粒,4.5g/次,3次/d,对照组口服维生素C,0.2g/次,3次/d,连续用药14周.采集AMD患者空腹静脉血并分离血清,采用ELISA法测定血清CFH及C5b-9蛋白质量浓度.结果 观察组血清sCFH治疗前后比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但sC5b-9治疗前后比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组血清sCFH、sC5b-9治疗前后差异均无统计学意义(P＞0.05).两组之间治疗后sCFH浓度比较差异有统计学意义(P＜0.05).千性AMD患者观察组血清sCFH治疗前后差异均有统计学意义(P＜0.05),但sC5b-9治疗前后差异均无统计学意义(P＞0.05).湿性AMD患者观察组血清CFH、C5b-9质量浓度治疗前后差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 杞黄颗粒对干性AMD患者的血清补体CFH有一定的调节作用,可能是中药杞黄颗粒可改善AMD患者视功能的作用机制之一.
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杞黄颗粒对大鼠脉络膜新生血管模型组织中ICAM-1蛋白及mRNA表达水平的探讨
目的 探讨杞黄颗粒对激光诱导脉络膜新生血管模型大鼠视网膜色素上皮层(RPE)一脉络膜一巩膜复合体ICAM-1蛋白含量及其mRNA表达水平的影响.方法 选取BN大鼠81只,随机选取13只为空白对照组,余68只大鼠右眼利用倍率532nm激光(功率300nw、曝光时间0.05s、光斑大小50um)光凝,建立CNV模型.光凝7天后,随机选取3只大鼠,行FFA和OCT检查,经心脏灌注处死,分别做RPE脉络膜-巩膜复合体铺片检测CNV的面积,验证大鼠脉络膜新生血管模型形成.余下65只造模大鼠随机分为五组,即杞黄颗粒A组、杞黄颗粒B组、雷珠单抗组、杞黄颗粒十雷珠单抗组,模型组.造模成功后开始给药,用药60天后总结,杞黄颗粒B组用药90天总结.实验结束采用心脏灌注处死,摘除右眼球,提取RPE脉络膜-巩膜复合体,应用Western blot技术分析ICAM-1蛋白含量,用Real-time PCR获取ICAM-1mRNA表达水平.结果 激光诱导大鼠CNV模型组织形成过程中ICAM 1蛋白的表达,5组ICAM-1/tublin差异有统计学意义(F=22.798,P＜0.01);空白对照组ICAM-1/tublin均低于其他各组(P＜0.01);模型组,杞黄颗粒组ICAM-1/tublin均高于杞黄颗粒十雷珠单抗组,差异有统计学意义(P＜0.01);杞黄颗粒十雷珠单抗组、空白对照组、雷珠单抗组差异均无统计学意义(P＞0.05);杞黄颗粒组和雷珠单抗组ICAM-1/tublin相比,差异无统计学意义(P＞0.05);60d杞黄颗粒组和90d杞黄颗粒组ICAM-1/tublin相比,差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组ICAM-1mRNA表达均低于其他各组(P＜0.01);模型组,杞黄颗粒组和雷珠单抗组ICAM-1mRNA表达均高于杞黄颗粒+雷珠单抗组,差异有统计学意义(P＜0.05);杞黄颗粒组和雷珠单抗组ICAM-1基因表达相比,差异有统计学意义(P＜0.01);90d杞黄颗粒组ICAM 1表达低于60d杞黄颗粒组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ICAM-1在CNV中存在高表达.雷珠单抗对ICAM 1的高表达有抑制作用,杞黄颗粒十雷珠单抗长时间联合使用的效果更好.
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杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法研究
目的:研究杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法.方法:研究了TLCS、HPLC-UV和HPLC-ELSD 3种方法.终选择HPLC-ELSD法:Shim-pack C18-ODS色谱柱,流动相乙腈-水(32:68),流速1.0 mL/min;ELSD参数:漂移管温度40℃,气流压强:4.1Bar.结果:回归方程为Y=1.614X+4.2577,r=0.9996,线性范围为2.036～7.635μg.回收率为97.55%,RSD为2.02%.结论:本研究建立的HPLC-ELSD法,方法简便、可靠、准确,可以作为杞黄颗粒的质量控制方法.
