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microRNA-1在低切应力诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用
[目的]研究microRNA-1 (miR-1)参与切应力条件下ECs (endothelial ceils,ECs)对VSMCs(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖活性调控的力学生物学反应机理,将有利于进一步探索动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制.[方法]应用细胞联合培养平行平板流动腔系统对与VSMCs联合培养的ECs施加15 dyn/cm2的正常切应力(normal shear stress,NSS)和5 dyn/cm2的低切应力(low shear stress,LowSS),加载时间为12 h;Western blotting检测联合培养VSMCs的细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达变化;实时荧光定量PCR检测联合培养VSMCs的miR-1表达变化;通过TargetScan、miRWalk等网站预测miR-1的目标蛋白;Western blotting检测联合培养VSMCs的miR-1靶蛋白锌指转录因子4(kruppel-like factor4,Klf4)的表达;通过转染技术,上调和抑制VSMCs的miR-1表达,Western blotting技术检测靶蛋白Klf4和PCNA的表达变化,以此验证miR-1对Klf4的负调控作用.[结果]与NSS相比,LowSS促进联合培养VSMCs的PCNA表达并显著抑制miR-1表达;TargetScan、miRWalk等网站预测miR-l的下游靶蛋白为Klf4;与NSS相比,LowSS明显上调联合培养VSMCs的miR-1靶蛋白Klf4的表达;静态条件下上调VSMCs的miR-1表达,靶蛋白Klf4和PCNA表达均显著降低,抑制VSMCs的miR-1表达,靶蛋白Klf4和PCNA表达均明显升高.[结论]LowSS通过联合培养VSMCs的miR-1及靶蛋白Klf4,促进VSMCs的增殖.
关键词： 低切应力 血管平滑肌细胞 microRNA-1 锌指转录因子4 增殖
