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人血管生成素-1基因的克隆及表达载体的构建
[目的]克隆人血管生成素-1基因,并构建原核、真核表达载体.[方法]提取人骨髓中的总RNA,反转录成cDNA,利用巢式PCR技术扩出人血管生成素-1基因片段,并克隆到PQE-31、B7载体中.[结果]克隆了正确的人血管生成素-1基因,构建了PQE31Ang-1、B7Ang-1载体.[结论]人血管生成素-1基因的克隆及表达载体的构建,为进一步研究其功能、活性和应用奠定了基础.
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人血管生成素-1真核表达载体的构建与表达
目的 构建人血管生成素-1的真核表达载体,真核表达人血管生成素-1蛋白并进行纯化.方法 通过聚合酶链反应(PCR)将人血管生成素-1基因片段插入B7载体中构建真核表达载体,通过转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞进行真核表达.结果 成功构建了B7Ang-1真核表达载体,在CHO细胞中进行了稳定表达,获得了纯化的人血管生成素-1蛋白.结论 真核系统表达的人血管生成素-1蛋白具有良好的抗原性,为进一步的生物活性研究和临床应用奠定了基础.
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人血管生成素-1原核表达载体的构建与表达
目的构建人血管生成素-1的原核表达载体,并进行表达. 方法利用PCR技术扩出人血管生成素-1基因片段,并克隆到PQE-31载体中,转化E.coli M15菌株后进行诱导表达.结果构建了PQE31Ang-1原核表达载体,在M15中进行了高效表达.结论通过原核表达得到人血管生成素-1蛋白,其具有良好的抗原性,为进一步的生物活性和应用研究奠定了基础.