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U0126对谷氨酸神经毒性损伤模型大鼠的脑保护作用
目的 探索U0126对脑组织谷氨酸神经毒性的保护作用及可能机制.方法 健康成年雄性SD大鼠皮层注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)建立脑组织谷氨酸神经毒性模型.首先,采用不同浓度NMDA(50、100、200 mmol/L)及处理不同时间(3、6、12、24 h)筛选佳的建模条件.根据选定的佳条件,实验设对照组、MAPK/ERK1/2抑制剂U0126单独处理组(2 g/L)、NMDA组(200 mmol/L)、不同浓度(0.5、1、2 g/L)U0126联合NMDA处理组.各组处理24 h后处死动物,脑组织切片后行HE染色组织评价损伤;蛋白质印迹法检测损伤部位环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Caspase-3(活化形式)及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平,确定U0126在脑组织谷氨酸神经毒性损伤中的保护作用.结果 (1)NMDA以时间和浓度依赖的方式导致大鼠皮层兴奋毒性损伤,激活MAPK/ERK1/2信号通路,加重脑组织损伤,选取200 mmol/L NMDA处理24 h进行建模.(2)与对照组相比,NMDA组脑损伤部位COX-2、iNOS、Caspase-3(活化形式)、p-ERK1/2表达明显增加.U0126+NMDA处理组与NMDA组相比,COX-2、iNOS、Caspase-3(活化形式)、p-ERK1/2表达水平随U0126浓度升高而降低,脑损伤的面积显著减小.结论 U0126对大鼠皮层谷氨酸神经毒性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制ERK1/2激活及其下游的炎症、凋亡信号途径有关.
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秦皮素体外抗乳腺癌作用与雌激素信号通路的关系
雌激素信号通路在调节乳腺癌细胞增殖和凋亡等生理机能中发挥重要功能.本文采用MTT法、流式细胞分析、Western blot等方法,通过检测秦皮素对MCF-7细胞周期分布、凋亡、雌激素受体蛋白、靶基因蛋白cyclin D1和Bcl-2、MAPK和PI3K信号通路等的影响,来探讨秦皮素的抗乳腺癌作用机制.实验结果显示,秦皮素对E2β促MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性.秦皮素可抑制E2β的抗细胞凋亡作用,将细胞周期阻滞在G0/G1期.同时,秦皮素还能降低MCF-7细胞中ERα蛋白的表达,通过下调靶基因蛋白cyclin D1和Bcl-2来影响E2β介导的基因组信号通路；通过抑制MAPK/Erkl/2蛋白的表达影响E2β介导的非基因组信号通路.研究结果表明,秦皮素可通过影响E2β介导的基因组途径和非基因组途径发挥抗乳腺癌作用.
关键词： 秦皮素 MCF-7细胞 MAPK/ERK1/2 -
碱性成纤维生长因子单克隆抗体联合伊立替康抑制小细胞肺癌H223细胞的增殖
目的 探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)单克隆抗体与伊立替康联合应用体外对抑制小细胞肺癌细胞株增殖和凋亡的作用及可能机制.方法 CCK8检测bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223增殖的抑制作用.AnneginV-FITC/PI染色流式细胞仪检测新型bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223凋亡的影响.Western blotting分析bFGF-mAb联合CPT-11对AKT和ERK1/2磷酸化水平的影响.结果 bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性抑制小细胞肺癌株H223的增殖,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组对小细胞肺癌株H223的增殖抑制率分别为18.73%、21.96%、54.30%,联合用药组抑制率明显高于单药组(P<0.05).bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性诱导小细胞肺癌株H223的凋亡,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组诱导小细胞肺癌株H223的早期凋亡率分别为2.7%、4.3%、6.5%,联合用药组凋亡率明显高于单药组(P<0.05).bFGF单克隆抗体组、CPT-11组及bFGF单克隆抗体联合CPT-11组可明显抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平,差异有显著性,而对AKT、ERK1/2蛋白则影响不大.bFGF抗体联合CPT-11一方面通过抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平来抑制肿瘤细胞的增殖和转移.结论 bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关.信号通路分析结果表明bFGF单克隆抗体联合伊立替康能有效阻断与bFGF相关的MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路.
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PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响
目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达.结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P＜0.05).结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力.
关键词： 胰腺癌 PI3K/AKT MAPK/ERK1/2 VEGF -
JAK激酶抑制剂AG490阻滞乳腺癌MCF-7的侵袭和迁移
目的 探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路的交联作用及其对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移的影响机制.方法 在乳腺癌MCF-7中,分JAK酶抑制剂AG490未处理组和处理组,Western blot检测磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK 1/2蛋白的变化,RT-PCR检测STAT3、ERK1/2 mRNA的变化,明胶酶谱法检测MCF-7分泌MMP-2、MMP-9的变化,同时应用Transwell小室对细胞侵袭迁移能力进行研究.结果 AG490处理MCF-7细胞后,磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK1/2蛋白均减少,STAT3、ERK1/2 mRNA转录水平也下降,同时也观察到了AG490能使MCF-7分泌MMP-2和MMP-9减少,从而显著降低了MCF-7细胞的侵袭迁移能力.结论 AG490可阻断JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路,抑制MCF-7细胞分泌MMP-2和MMP-9,从而抑制了其侵袭迁移.
