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HBx突变体特异性抗血清的制备及临床研究
目的 探讨HBx突变体特异性抗血清的制备及临床效果.方法 通过多肽合成的方法制备HBx-d431、HBx-d382缺失型突变体特异性多肽抗原,免疫动物制备相应抗血清.产生的抗体经纯化、酶标后,建立检测HBx-d431、HBx-d382特异性多肽抗原及其抗体的ELISA方法.通过对肝细胞癌患者和非肝细胞癌患者临床标本的检测,研究HBx-d431、HBx-d382缺失型突变体多肽抗原及其抗体的临床意义.结果 ELISA法研制的兔抗体HBx-d431、HBx-d382多克隆抗体均能与相应的抗原发生反应,并随着兔抗血清稀释的增加,A值会逐渐下降,肝细胞癌组HBxAg-w、HBxAg-m、HBxAb-w和HBxAb-m明显高于正常健康组,差异有统计学意义.结论 建立的ELISA方法将可用于HBV相关肝细胞癌的早期诊断、HBV携带者及慢性乙肝患者的监测.
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HBx基因缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的影响
目的 前期的研究成功构建了稳定表达HBx基因及其缺失突变体( HBx-d382)的L02细胞,分别命名为L02/HBx和L02/HBx-d382,并证实其可导致肝细胞恶性转化.该研究进一步探讨HBx-d382对L02细胞G1期细胞周期调控相关基因cyclinD1,cyclinG1和E2F1表达的影响.方法 实验分为L02/pcDNA3.0(稳定转染pcDNA3.0)、L02/HBx和L02/HBx-d382(分别稳定转染质粒pcDNA3.0/HBx和pcDNA3.0/HBx-d382)3组.通过实时定量PCR以及wester-blot检测转染HBx基因及其缺失突变体HBx-d382后L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的改变.结果 实时定量PCR以及wester-blot结果表明稳定表达HBx基因或HBx-d382的L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达上调,表达HBx-d382的L02细胞上调为明显.结论 HBx-d382可能通过上调cyclinD1、cyclinG1和E2F1从而影响细胞G1期调控,进一步导致肝细胞恶性转化.
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乙肝病毒突变体HBx-d382 PCR检测方法的建立及临床应用
目的 建立检测乙肝病毒突变体HBx-d382的PCR方法,探讨HBx-d382突变体在诊断HBV相关肝细胞癌中的应用价值.方法 运用生物信息学和核苷酸合成的方法,设计和合成检测乙肝病毒突变体HBx-d382的特异性引物.采用PCR方法对82份HBV相关肝细胞癌病人血清、96份慢性HBV感染者血清和20份正常对照者血清中HBx基因进行检测.采用基因测序法对HBx基因进行分析,并与PCR结果进行比较.结果 在慢性HBV感染者和肝细胞癌病人血清中,HBx-d382的检出率分别为2.1％与17.1％.与慢性HBV感染者相比,肝细胞癌病人血清中HBx-d382检出率较高(x2=4.21,P＜0.05),且PCR检测结果与基因测序结果相符.结论 肝细胞癌病人血清中存在乙肝病毒突变体HBx-d382,采用PCR方法检测HBx-d382突变体对早期诊断HBV相关肝细胞癌有一定的价值.
