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靶向FoxM1基因的短发夹RNA干扰表达载体的构建和鉴定
目的 构建靶向FoxM1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰表达载体质粒,为进一步探讨FoxM1在肺部恶性肿瘤及其他疾病中的作用奠定基础.方法 化学合成可编码靶向FoxM1基因的siRNA的短发夹DNA (shDNA)片段,通过基因重组将其插入到线性化的shRNA表达质粒骨架pSilencer 2.1-U6中,对得到的新质粒进行酶切鉴定和基因测序.结果 所构建的质粒载体中成功插入了可编码靶向FoxM1基因的siRNA的shDNA片段.结论 成功构建了靶向FoxM1基因的shDNA表达载体.
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叉头盒转录因子M1调控葡萄糖转运蛋白1影响胃癌细胞的糖代谢及生物学特性
目的 观察叉头盒转录因子M1(FOXM1)通过调控葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达对胃癌细胞的糖代谢、细胞增殖和凋亡的影响.方法 Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测胃癌细胞(AGS、SGC-7901)和正常胃黏膜细胞(GES-1)3株细胞中FoxM1、GLUT1的蛋白及mRNA的表达.转染FoxM1过表达载体和小干扰RNA(siRNA)感染序列至胃癌细胞,检测FoxM1和GLUT1表达及细胞对葡萄糖的摄取变化.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞凋亡检测分析细胞凋亡,并与阴性转染细胞比较.结果 AGS、SGC-7901细胞中FoxM1 mRNA的相对表达量为2.624±0.167、3.023±0.159(t=16.686,P=0.004;=21.810,P=0.002),GLUT1 mRNA的相对表达量为3.582±0.237、3.867±0.285(t=18.700,P=0.003;t=17.315,P=0.003),均明显高于正常胃黏膜细胞.FoxM1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量2.852±0.271、2.533 ±0.243(t=11.814,P=0.007;t=10.900,P=0.008)较GES-1中1.000±0.017明显升高.GLUT1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量3.716±0.316、3.367±0.335较GES-1中1.000±0.021明显升高(t=14.854,P=0.005;t 12.214,P=0.007).转染FoxM1过表达载体后AGS、SGC-7901两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显升高,糖摄取量增加(t=3.242,P=0.048;t=3.964,P =0.029).AGS转染后48 h和72 h促进细胞增殖(t=10.062,P=0.002;t =6.466,P=0.008),抑制细胞凋亡[(1.36±0.29)％比(3.16±0.32)％,t=-7.219,P=0.006].转染FoxM1 siRNA感染序列后两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显降低,糖摄取量减少(t=-4.217,P=0.024;t=-3.879,P =0.030).AGS转染后48 h和72 h抑制细胞增殖(t=-10.280,P=0.002;t=-12.530,P=0.001),促进细胞凋亡[(8.02±0.69)％比(3.03±0.26)％,t=11.722,P=0.007].结论 FoxM1调控GLUT1表达促进胃癌细胞葡萄糖摄取和细胞增殖,抑制细胞凋亡.
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沉默信息调节因子1和叉头盒转录因子M1在病理性瘢痕组织中的表达及意义
目的 观察沉默信息调节因子1(SIRTl)和叉头盒转录因子M1(FOXMl)在病理性瘢痕中的表达及其相互关系,探讨它们在瘢痕形成中的作用及机制.方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法、Western blot检测正常皮肤(10例)、成熟瘢痕(10例)、病理性瘢痕(10例)组织中SIRT1和FOXM1的mRNA、蛋白表达水平并进行统计学分析.结果 正常皮肤、成熟瘢痕、病理性瘢痕组织中SIRT1的mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.0、1.187982±0.082916、2.402 178±0.178 598;0.498 614±0.056 342、0.534 159±0.044 509、0.976 829±0.145 736.FOXM1的mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.0、1.196 429±0.086 786、2.447 249±0.128 875;0.469 935±0.089 373、0.552 653±0.078 293、0.915 367±0.114097.病理性瘢痕组织中SIRT1与FOXM1的mRNA相对表达水平均显著高于正常皮肤、成熟瘢痕(P＜0.01);病理性瘢痕组织中SIRT1与FOXM1的蛋白相对表达水平均明显增高,与正常皮肤、成熟瘢痕对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SIRT1和FOXM1在病理性瘢痕组织中表达增高,通过调节这两个因子的表达,可能促进瘢痕组织中细胞的增生,对病理性瘢痕的形成可能起重要作用.
