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侧脑室注射河豚毒素和藜芦定对大鼠异氟醚MAC的影响
目的观察侧脑室注射河豚毒素(TTX,钠通道阻断剂)或(和)藜芦定(VER,钠通道激动剂)对大鼠异氟醚低肺泡有效浓度(MAC)和翻正反射恢复时间的影响.方法大鼠侧脑室置管后2d,进行MAC测定.40只SD大鼠随机分为5组:生理盐水(NS)组、TTX组、含4%二甲亚砜生理盐水(DMSO)组、VER组和VER+TTX组.测定每组大鼠侧脑室给药前和给药后MAC,MAC测定结束后记录大鼠翻正反射恢复时间.结果25μmol·L-1的TTX 2μL明显降低了异氟醚的MAC,延长了翻正反射恢复时间.5mmol·L-1的VER 2μL对异氟醚的MAC和翻正反射恢复时间皆无影响,但可部分拮抗TTX降低异氟醚MAC和延长翻正反射恢复时间的作用.结论电压门控性钠通道可能不是异氟醚全麻作用的主要靶位.
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藜芦定增强反向Na+/Ca2+交换电流诱导家兔心室肌细胞内Ca2+超载和动作电位异常延长
本文应用全细胞膜片钳记录技术、可视化动缘探测系统及细胞内钙测定系统和多道生理信号采集处理系统,研究藜芦定(veratridine,VER)对家兔心室肌细胞持续钠电流(persistent sodium current,INa.P)、Na/Ca2+交换电流(Na+/Ca2+ exchange current,InNCX)、钙瞬变及动作电位(action potential,AP)的影响,并探讨其引起细胞内Ca2+超载和增强心肌收缩的发生机制.结果显示,给予心室肌细胞10、20 μmol/L VER后,INa.P和反向INCX电流密度均增大,再加入4μmol/L河脉毒素(tetrodotoxin,TTX)后,INa.P和反向IMCX电流密度均又明显减小.在另一组实验中,特异性INa.P阻断剂雷喏嗪(ranolazine,RAN)也明显抑制由VER诱导增大的INa.P和反向INCX.加入2.5 μmol/L VER后,心室肌细胞大收缩速率、收缩幅度和钙瞬变基线(舒张期Ca2+浓度)均增大,加入2 μmol/L TTX后上述三项指标均明显减小.VER (20 μmol/L)可使心室肌细胞AP复极至50％(action potential duration at 50％ repolarization,APD50)和90％的时间间(action potential duration at 90％ repolarization,APD90)延长,其中3例出现早期后除极(early afterdepolarizations,EADs),加入4μmol/L TTX后APD50、APD90均叫显缩短,3例EADs均消失.实验结果提示:(1)VER作为特异性INa.P的开放剂,可引起心室肌细胞INaP增大而产生细胞内Na+超载,继而通过反向INCX的增大导致细胞内Ca2+超载.(2)由VER诱导增大的心室肌细胞INa.P还n可引起心室肌细胞APD延长,诱发EADs.(3) TTX对由VER引起的上述指标的异常变化均有明显抑制作用,说明上述指标的异常变化是由INa.P增大所引起.以上结果表明,VER作为INa.P的开放剂,通过增大INa.P而引起反向INCX增强,终导致细胞内Ca2+超载和APD异常延长.
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左心室内推注藜芦定建立犬Bezold-Jarisch反射模型
目的:观察左心室内推注藜芦定诱发的Bezold-Jarisch反射(BJR),并建立犬BJR模型. 方法:7只杂种犬麻醉后经左颈动脉插入心导管至左心室,先后经心导管弹丸式推注藜芦定5、10、15和20μg/kg,记录心率(HR)、平均动脉压(MAP)推药前的基础值、推药后的低值及大下降值ΔHR、ΔMAP.待前一剂量藜芦定推注后HR及MAP恢复至推药前的基础值水平并稳定15min以上后再推注后一剂量.观察藜芦定剂量与ΔHR、ΔMAP所占基础值百分比之间的关系,以两者百分比均>50%作为犬BJR模型的标准. 结果:7只犬左心室内推注4个不同剂量藜芦定后均诱发出BJR,表现为HR及MAP的一过性下降,两者的低值均明显低于基础值(P<0.01).推药后HR的低值随推药剂量增大而减少,ΔHR百分比随推药剂量增大而增大,相邻2个剂量之间的HR低值及ΔHR百分比相比,差异均有统计学意义(P<0.05).推药后MAP的低值随推药剂量增大而减小,但相邻2个剂量之间的MAP低值相比,仅10与5μg/kg之间差异有统计学意义(P<0.05);ΔMAP百分比随推药剂量增大而增大,10与5μg/kg之间、15与10μg/kg之间ΔMAP百分比相比差异均有统计学意义(P<0.05).15和20μg/kg藜芦定推注后ΔHR及ΔMAP百分比平均值均>50%. 结论:左心室内弹丸式推注15和20μg/kg藜芦定能成功建立犬BJR模型,该方法操作简便、可靠性高.
关键词： 藜芦定 Bezold-Jarisch反射 迷走神经 -
麻痹性贝类毒素细胞检测法的建立
目的:麻痹性贝类毒素的N-2a细胞检测方法的建立并确定可能的检测限值.方法:使用不同浓度毒素标准品结合藜芦定和乌本苷共同作用对数生长期的N-2a细胞,通过cck-8试剂盒检测细胞毒性,确立细胞检测方法的检出限及比较各毒素作用大小,并同步利用小鼠生物法进行验证,通过精确记录小鼠死亡时间,比较各毒素的毒作用大小.结果:麻痹性贝类毒素能明显降低藜芦定和乌本苷的细胞毒性,且具有剂量-反应关系,通过比较得出毒素各成分毒性大小为:neoSTX>STX>dcSTX>GTX1,4>GTX2,3>dcGTX2,3;小鼠生物法的毒作用平均死亡时间为:neoSTX组(6.5 min),GTX1,4组(8.0 min),STX组(9.0 min),dcSTX组(15 min);GTX2,3组和deGTX2,3组未见动物死亡.结论:细胞检测与小鼠生物法具有较好的一致性,表明所建立的细胞检测法可行,且细胞毒性试验检测方法具有较高的灵敏度,低检出限值可达到10-9 mol/L剂量水平,其中浓度在10-6～10-8 mol/L间具有较好的线性.
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反相高效液相色谱法测定藜芦生物碱中藜芦定的含量研究
目的: 建立测定藜芦生物碱中藜芦定含量的反相高效液相色谱分析方法.方法: 采用Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1M乙酸铵(60:40)为流动相,流速1.0ml·min-1,检测波长220nm;柱温30℃. 结果: 藜芦定在0.96～9.6 μg线形关系良好,r=0.9999,藜芦定平均加样回收率为96.4%,RSD为1.6%(n=5). 结论:本方法准确、简便,重现性好.
