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HLA 分型技术在骨髓库上海分库高分辨检测工作中的初步应用
HLA 分型技术在骨髓库上海分库高分辨检测工作中的初步应用.方法:使用ABI3730xlDNA 测序仪,采用SBT 单链直接测序法,对上海地区的960 份自愿加入中华骨髓库的志愿者血液标本进行DNA 测序,其中HLA-I 类基因对第2,3 和4 外显子单链单向测序,II 类基因对第2 外显子单链单向测序,以得HLA 高分辨分型结果;对部分呈现血清学表达不一致的模棱两可高分辨结果标本,通过S S O 技术确认;对部分呈现血清学表达一致的模棱两可高分辨结果标本,通过SSP 或对2,3,4 以外的外显子单链检测作进一步确认.结果:960 份中华骨髓库上海分库的样本进行HLA 的PCR-SBT 高分检测,用DNA 单链测序法一次性获得高分辨结果为720 例;对部分呈现血清学表达一致的模棱两可高分辨结果标本,通过S S P 技术或2,3,4 以外的外显子单链检测做进一步确认,共计标本211 例;对于部分呈现血清学表达不一致的21 例模棱两可高分辨结果标本我们采用S S O 技术终确认了唯一的高分结果;此外,还检测到待确认新基因4 例.完成了本次实验标本100%高分结果入库要求.结论:SBT 单链测序技术为主,PCR-SSO,PCR-SSP 联合为辅,是骨髓库开展HLA 高分辨分型工作的有力工具.
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利用唾液标本进行HLA分型的可行性分析
目的 探讨利用唾液样本提取DNA进行HLA高分辨分型的可行性.方法 采集6例造血干细胞移植患者和10例供者唾液样本各2 mL,EDTA抗凝静脉全血3 mL.采用Qiagen全血基因组提取试剂盒和Oragene唾液DNA提取试剂盒分别于全血和唾液样本中提取DNA,琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量.采用PCR-SSOP和PCR-SBT方法 对血液提取DNA和唾液提取DNA进行HLA高分辨分型,并对分型结果 进行比较.结果 唾液提取DNA浓度69.75±44.96,A260/A280比值为1.77±0.07;血液提取DNA浓度63.06±33.99,A260/A280比值为1.75±0.04.唾液来源DNA PCR-SSOP结果 明确,DNA PCR-SBT高分辨分型中无杂峰和碱基错配.16例样本唾液来源DNA的HLA高分辨分型结果 和血液来源DNA的结果 完全一致,符合率为100%.结论 唾液提取的DNA可用于HLA高分辨分型.
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PCR-SBT技术在山东骨髓分库HLA高分辨分型工作中的初步应用
目的 将基于测序分型(SBT)技术应用干中华骨髓库山东分库建设的探讨.方法 使用ABI 3730 xlDNA测序仪,采用SBT直接测序法,对山东地区的3 500份志愿者血液标本进行DNA测序,其中HLA Ⅰ类基因对第2、3和4外显子双向测序,Ⅱ类基因对第2外显子双向测序,以得到其HLA高分辨分型结果 ;对部分呈现中分辨分型结果 的标本,通过SSSP技术确认.结果 HLA-A、B、DRB1位点分别有48.23%、42.86%和76.91%得到高分辨结果.此3个位点均获得高分结果 的比例为15.91%.在随机增选的760例中分辨标本中,659例(86.71%)经SSSP技术后,获得高分辨结果.结论 SBT技术是骨髓分库开展HLA高分辨分型工作的有力工具.
