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脊灰病毒分离和鉴定新检测流程的应用
目的 缩短检测脊灰病毒的时限,及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV).方法 对河北省2013年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者的粪便标本用L20B和RD两种细胞进行病毒分离,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,rRT-PCR)对分离到的L20B阳性分离物进行型内鉴定和血清型鉴定.结果 从送检的334例AFP病例及接触者粪便标本中检测出L20B阳性分离物26株,用real-time PCR法进行了病毒血清型鉴定和型内鉴定,共监测到脊灰疫苗类似株(sabin-like,SL) 19株,其中Ⅰ型9株、Ⅱ型1株、Ⅲ型6株、混合型3株;将混合型进行单型分型后共得24株,进行VP1区核苷酸序列测定,发生高变异的两株出现在Ⅰ型,均为6个核苷酸变异.结论 2013年分离到的脊灰疫苗病毒有部分变异,没有发现疫苗衍生脊灰病毒.
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应脊灰型内鉴定新方法在脊灰实验室的应用
目的 在河北省脊髓灰质炎(脊灰)实验室首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)对脊灰病毒(PV)进行鉴定,并对该方法进行评估,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法做准备. 方法 采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对河北省既往分离的PV和WHO发放的PV株进行型内鉴定(intratypic differentiation,ITD)和疫苗衍生PV(vaccine-derived PV,VDPV)筛选. 结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果不能完全相符,有2株Ⅱ型脊灰病毒被错判为NSL,假阳性率为6.9％ (2/29). 结论 Real time PCR脊灰型内鉴定方法可以在河北省脊灰实验室用于脊灰病毒的常规监测.
