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以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻保存人卵巢组织的效果比较
目的 比较以细胞筛为载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻用于人卵巢组织冷冻的效果. 方法 人卵巢组织取皮质切块后,随机分为3组:新鲜组织对照组(F组)、慢速程序化冷冻组(S组)及以细胞筛为载体玻璃化冷冻组(V组).卵巢组织冷冻复苏后,固定切片后行苏木素-伊红染色,观察卵泡形态;使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,观察卵泡凋亡情况;部分卵巢组织体外培养,隔日采集培养液后检测雌二醇(E2)浓度.比较三组卵泡正常形态率、卵泡凋亡率及E2浓度. 结果 与F组原始卵泡正常形态率(91.1％)相比,V组原始卵泡正常形态率(88.1％)无显著差异(P＞0.05),而S组原始卵泡正常形态率(79.6％)显著下降(P＜0.001);V组初级卵泡正常形态率(74.2％)与S组(73.6％)相似,但两组均低于F组(89.0％)(P＜0.05);凋亡检测中,3组凋亡率无显著差异(P＞0.05);体外培养2周,各组E2浓度持续上升,F组B浓度显著高于S组、V组(P＜0.001),而S组与V组E2浓度无显著差异(P＞0.05). 结论 以细胞筛为载体的玻璃化冷冻能较好地保存人卵巢组织,复苏后组织体外培养后,还可持续分泌E2.
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人卵巢组织冷冻-移植技术研究进展
医疗水平的提高使得肿瘤患者长期存活,在肿瘤治疗前保存患者生育功能是提高其生存质量的重要方面,卵巢组织冷冻-移植技术在女性生育力保存中具有举足轻重的作用.随着冷冻技术的不断推广和新技术的诞生,卵巢组织冷冻-移植技术有着越来越宽广的应用前景.
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卵巢冷冻与癌症患者生育力的保存
近些年来,随着各种放化疗方法的出现及广泛应用,癌症患者可能获得长期生存的机会,与此同时,越来越多女性癌症患者希望能对自己的生育力予以保存.然而,癌症放化疗的副作用之一就是对生殖系统有较大损伤.据统计,经过放化疗的患者中有超过40%的人面临不孕和早绝经的痛苦,所以生育力的保存显得尤为重要.目前临床中有多种方法保存生育力,如卵子冷冻、胚胎冷冻、卵巢冷冻等.卵巢冷冻相比其它两种冷冻方法,不会因需要控制性超排卵而延迟治疗,且不受有无配偶的限制,所以对于女性癌症患者而言,卵巢冷冻可以成为一项保存生育力的理想措施.
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卵巢冷冻技术的伦理学思考
卵巢冷冻技术的发展给不孕症患者尤其是那些因放化疗导致不孕的青年女性肿瘤患者带来了福音.然而伴随着技术的发展,新的伦理学问题不断涌现,并日益受到学者们的关注.如何解决这些问题是确保卵巢冷冻技术合理发展的必要条件.现就该技术相关伦理学的热点问题做一综述.
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慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果对比观察
目的 对比分析慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果.方法 将BALB/C雌性小鼠随机均分为慢速冷冻组、玻璃化冷冻组,取卵巢组织后分别迸行慢速冷冻、玻璃化冷冻.冷冻21天结束时,取卵巢组织迸行病理学观察,比较两组各级卵泡正常率;采用免疫组化法检测卵巢组织中血管生成素2 (Ang-2)及其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达.结果 慢速冷冻组始基卵泡正常率高于玻璃化冷冻组(P<0.05),初级卵泡、次级卵泡正常率比较差异均无统计学意义(P 均 >0.05).两组颗粒细胞冷冻前Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后颗粒细胞 Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;两组卵泡膜细胞冷冻前Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后卵泡膜细胞 Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;组间及组内比较 P均 <0.05.结论 慢速冷冻法、玻璃化冷冻法均会损伤卵巢组织内各级卵泡,并导致Ang-2、Tie-2表达变化,但慢速冷冻法对卵巢组织的损伤更小.
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异种移植模型中血小板源生长因子改善人卵巢组织移植物微循环重建研究
目的 通过运用前期研究提出新型卵巢组织玻璃化冷冻方法,改善了卵巢组织间质和微血管存活状况,在前期研究基础上,时卵巢组织冷冻带来的间质损伤在冻融后进行体外培养修复,培养中通过添加血小板源生长因子(PDGF)改善移植后血管重建过程.方法 对3例患者的卵巢组织皮质片进行深低温保存.将3例其24片卵巢组织片配对分为PDGF干预组和对照组,每组各12片组织,通过体外短期培养24小时并在培养期间在PDGF组添加100ng/tl的PDGF作为干预,观测培养前后卵巢组织体外生长趋势.将两组卵巢组织移植到SCID小鼠皮下,两周后将皮下组织取出,观测组织血管重建情况,比较各组微血管密度计数以及组织生长活性及凋亡情况.结果 在异种移植模型中通过免疫组织化学法检测卵巢新生微血管提示,添加PDGF因子培养后的卵巢组织移植物新生微血管密度计数显著高于普通培养条件下的卵巢组织移植物.同时采用免疫荧光方法原位检测组织凋亡(TUNEL)情况表明添加PDGF因子培养后的卵巢组织移植物凋亡细胞比例与对照组相比显著降低.结论 我们首次在卵巢组织体外培养过程中短期添加PDGF促进卵巢血管生成.在异种移植模型中,我们发现添加PDGF因子的移植物微循环重建情况显著改善,并且移植物凋亡情况与对照组显著降低.以上结果为优化卵巢组织体外培养以及移植物微循环重建效果提供了新思路.
