抗甲型流感H1N1病毒红树林内生放线菌的筛选及菌株HA12210的鉴定
摘要： 目的 对红树林内生放线菌进行抗H1N1病毒活性检测,并对具有较高活性的菌株HA12210进行鉴定.方法 采用嗜杀酵母系统和CPE+ MTT联合法模型对菌株发酵液进行抗H1N1病毒活性的初筛和复筛；对菌株HA12210进行培养和形态特征、生理生化特征的鉴定,测定其16S rDNA序列并进行系统发育分析.结果 菌株HA12210发酵液稀释20倍后对H1N1病毒的抑制率达到73.2％.HA12210与Micromonospora marina JSM1-1T形态和生理生化特征接近,并与其16S rDNA序列相似性高(99.70％),且在发育树上聚为同一分支.结论 鉴定活性菌株HA12210为Micromonospora marina,本文首次报道了该菌株的抗H1N1病毒活性.
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海参EPA-PC对非酒精性脂肪肝大鼠三酰甘油代谢的改善作用
目的 探究海参磷脂型二十碳五烯酸(EPA-PC)对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠三酰甘油代谢的影响.方法 采用饮食中添加乳清酸的方法诱导建立NAFLD大鼠模型.雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、洛伐他汀对照组、EPA-PC高、低剂量组.饲喂3周后,检测大鼠肝脏及血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)及三酰甘油(Triglycerides,TG)含量;RT-PCR法检测大鼠肝脏中TG合成相关基因GPAT和DGAT,TG分解相关基因ATGL和HSL以及AMPK信号通路相关基因CAMKK和LKB1 mRNA的表达水平.结果 EPA-PC可以显著降低NAFLD大鼠血清和肝脏中TG和TC的含量,显著下调GPAT、DGAT和HSL的表达,显著上调ATGL和AMPK信号通路相关基因表达.结论 EPA-PC可以通过抑制TG合成,促进TG分解,并激活AMPK信号通路,从而改善NAFLD大鼠的TG的代谢.
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1株六放珊瑚来源真菌Exserohilum sp.中活性天然产物研究
目的 研究六放珊瑚来源的真菌Exserohilum sp.中活性天然产物.方法 综合运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备型HPLC等分析和分离技术分离纯化天然产物,利用核磁、质谱等现代波谱分析方法对化合物进行结构鉴定,以致病真茵、细菌和海洋污损细菌为活性模型对化合物进行抗微生物活性评价.结果 从Exserohilum sp.中分离鉴定了4个天然产物(1～4),化合物3对致病真菌Candida albicans和海洋污损细菌Pseudomonas aeruginosa显示中等抑制活性,MIC分别为16.3和32.6 μmol/L.结论 从海洋来源的真菌中分离获得天然产物1～4,化合物3对致病真菌和海洋污损细菌显示中等抑制活性.
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海绵共附生真菌P.chrysogenum次级代谢产物的化学成分及生物活性研究
目的 对分离自西沙隋氏蒂壳海绵共附生真菌Penicillium chrysogenum的次级代谢产物进行化学成分及生物活性研究,以期发现结构特异并且活性良好的次级代谢产物.方法 对隋氏蒂壳海绵共附生真菌P.chrysogenum用真菌2号培养基发酵,发酵后的茵丝体采用溶剂提取、萃取和现代色谱分离纯化手段,再运用现代核磁波谱技术并结合高分辨质谱鉴定化合物结构.基于微阵列技术的表面等离子体共振成像(SPRi)系统,检测化合物与肿瘤相关蛋白的相互作用,并提供化合物与肿瘤相关蛋白的结合动力学数据.结果 通过分 离隋氏蒂壳海绵共附生真菌P.chrysogenum的茵丝体提取物,从中分离鉴定了7个单体化合物,鉴定结果为conidiogenone(1)、2-acetylquinazolin-4(3H)-one(2)、153-hydroxyl-(22E,24R)-ergosta-3,5,8,22-tetraen-on(3)、ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one (4)、2-((2E,4E)-hexa-2,4-dienoyl)-5,6-dihydroxy-4,6-dimethylcy-clohex-4-ene-1,3-dione(5)、(22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol (6)、2-(1-hydroxyethyl)quinazolin-4(3H)-one(7).结论 化合物3和6是从Penicillium属内首次分离得到,化合物4是从真菌P.chrysogenum中首次分离得到,化合物5与肿瘤蛋白VEGFR-1、FGFR有亲和作用,KD的数值分别为7.78×10-3和1.44×10-1 μmol/L.
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仿刺参(Apostichopus japonicus)中皂苷类成分的分离鉴定及细胞毒活性研究
目的 对仿刺参(Apostichopus japonicus)体内皂苷类成分进行分离及结构鉴定,研究纯化皂苷的抗肿瘤细胞毒活性.方法 以鲜仿刺参为原材料,选用60％的乙醇溶液从海参中提取出海参皂苷,然后通过有机溶剂萃取法、大孔树脂法、硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备HPLC分离纯化海参皂苷,采用LTQ Orbitrap XL 质谱、Jeol JNM-ECP 600核磁技术对得到的海参皂苷进行结构鉴定,以人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)、人肝癌细胞(BEL-7402)、人肺腺癌细胞(NCI-H1975)和正常肝细胞(L1-02)为对象对纯化皂苷抗肿瘤细胞毒活性进行研究.结果 从鲜仿刺参同时得到3种三萜皂苷类化合物,分别为Holotoxin D、Holotoxin B1和Holotoxin A1.3种皂苷的细胞毒活性具有一致性,对肿瘤细胞具有良好的抑制率,抑制率均随皂苷单体浓度增大而增大,且到达一定浓度后趋于稳定,均呈现弱效抑制作用.结论 从鲜仿刺参中同时纯化得到Holotoxin D,Holotoxin B1和Holotoxin A1,比例为1∶7.97∶14.94.3种皂苷单体具有良好的抗肿瘤活性,Holotoxin D抗肿瘤活性为首次报道,本研究为以后的肿瘤药物的筛选研究奠定了良好的基础.
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1株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究
目的 对1株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6进行发酵优化,提高其代谢产物青霉酸的产量,以期获得足量的化合物研究青霉酸对水稻纹枯病菌的拮抗性.方法 采用正交实验设计对真菌HK1-6产青霉酸的土豆液体培养基进行优化,采用高效液相色谱法对青霉酸产量进行定量分析.结果 研究表明,真菌HK1-6高产青霉酸的土豆液体培养基各因素优水平为葡萄糖30g·L-1,土豆200 g·L-1,海盐10 g·L-1,pH为4,产量可达0.908 g·L-1,而原发酵条件下青霉酸产量约为0.423 g·L-1.结论 真菌HK1-6采用优土豆液体培养基发酵后,青霉酸的产量显著提高,产量较原培养条件提高约1.1倍.
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色氨酸分解代谢途径阻断对深海链霉菌ZH66次级代谢及生长的影响
目的 以深海链霉菌Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66为研究对象,通过阻断其色氨酸分解代谢途径,探究代谢产物与生长的变化.方法 通过Blastp分析寻找S.somaliensis SCSIO ZH66基因组上编码色氨酸双加氧酶基因tdo(ORF0630和ORF6017),在前期阻断ORF0630的基础上采用PCR-targeting的策略阻断ORF60 17,通过HPLC检测发酵产物的变化,并观察用不同培养基培养时突变株与野生株生长的差别.结果 与野生株相比,突变株ZH66Atdo不产生antimycins,但无其他次级代谢产物的变化.与此同时,ZH66△tdo在MS平板上开始产生气生菌丝与孢子的时间均提前了12 h,在ISP-2液体培养基中生长对数期开始时间同样提前12h.结论 链霉菌S.somaliensis SCSIO ZH66中色氨酸分解代谢途径的阻断未促进其他可能以色氨酸为前体次级代谢产物的合成,而是促进了菌株的生长,为其他链霉菌中色氨酸分解代谢调控提供了借鉴.
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深海真菌A.tubingensis的次生代谢产物的研究
目的 对1株来源于深海环境的真菌Aspergillus tubingensis的次生代谢产物及生物活性进行研究.方法 通过初步体外活性筛选,从10株来源于雅浦海沟的真菌中筛选获得1株发酵提取物,具有人肿瘤细胞毒和海虾毒性的真菌A.tubingensis,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20色谱、半制备HPLC等色谱学方法对菌株发酵提取物的活性部位进行分离纯化;通过NMR、MS、IR等光谱学方法,并结合文献数据对比鉴定了化合物的结构;对分离得到的化合物进行海虾致死及细胞毒活性测试.结果 分离得到了5个单体化合物.结构确定为:malformin C(1)、malformin E(2)、diketopiperazine dimer(3)、cristatumin E(4)、tensidol B(5).活性数据结果显示,化合物1、2具有强海虾毒性(LD50值分别为7.88和15.00 μg·mL-1);同时,具有显著的HepG2细胞毒性(IC50值分别为2.42和34.02 μmol·L-1).结论 雅浦海沟真茵A.tubingensis能够代谢产生具有海虾致死和细胞毒活性的次生代谢产物.
关键词： A.tubingensis 次生代谢产物 结构鉴定 生物活性 -
以非洲猪瘟病毒DNA聚合酶X为靶点的海洋药物计算机虚拟筛选
目的 从天然产物中高效快速地筛选出一批有效针对非洲猪瘟病毒的药物苗头化合物,为寻找能抑制猪瘟蔓延的生物饲料提供线索.方法 利用计算机辅助药物设计技术,以非洲猪瘟病毒DNA聚合酶X的DNA结合区为靶点,进行虚拟筛选,在陆生和海洋天然产物中,化合物通过文献搜索和数据库查询明确部分天然产物的来源.结果 从陆生天然产物库中筛选出16个苗头化合物,其中有5个源自中国;在海洋化合物数据库MarinChem3D中得到了59个苗头化合物,其中有8个源自中国.结论 中国境内分布有13种潜在的具抑制非洲猪瘟效果的天然产物,其中大部分来源于海洋生物.
关键词： 非洲猪瘟病毒 天然产物 海洋化合物 非洲猪瘟病毒DNA聚合酶X 虚拟筛选 -
差热/热重分析法鉴别不同的海参
目的 建立1种快速分析与鉴别不同种海参的方法,采用热重-微分热重(TG-DTG)与差热分析(DTA)方法 分别对不同种类海参进行分析.方法以α-Al2O3为参照物,N2为气氛的条件下,升温速率为10℃·min-1,温度范围为50～600℃,进行各种海参的热分析图谱的比较鉴别.结果 不同海参的TG-DTG和DTA图谱中的峰形存在很大的差异.在DTG谱图中,俄罗斯红参与球参分别有1个较大峰,威海刺参有1个较小峰,茄海参无明显峰,黄玉参、梅花参与光秃参分别有1个较大峰1个较小峰,但峰的形状与位置均有明显不同.在DTA谱图中,俄罗斯红参与光秃参分别有2个明显吸热峰,茄海参有2个明显放热峰,黄玉参与威海刺参分别有1个明显吸热峰,梅花参有3个明显放热峰,球参有1个明显放热峰.结论 实验表明热分析法具有用量少、易操作、图谱易分析、方便快捷等优点,可以作为1种快速鉴别不同海参的方法.
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鳕鱼肉酶解产物对小鼠抗疲劳和体内抗氧化作用
目的 研究鳕鱼肉酶解产物的抗疲劳和体内抗氧化作用.方法 以阿拉斯加狭鳕鱼肉为原料,经菠萝蛋白酶和风味蛋白酶分步酶解,通过离心、喷雾干燥等工艺制得鳕鱼肉酶解产物.测定酶解产物的氨基酸组成;给小鼠灌胃不同剂量的酶解产物,测定小鼠力竭游泳时间,肝糖原含量,血清中乳酸、尿素氮、丙二醛含量以及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活力.结果 酶解产物能显著延长小鼠的游泳时间,与空白对照组相比,低、中、高剂量组能够降低小鼠体内乳酸、血尿素氮和丙二醛含量,提高小鼠体内肝糖原含量,且能够提高小鼠体内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶的活力.结论 酶解产物具有较好的抗疲劳和体内抗氧化作用.
