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重组信号分子GRF的PH结构域抑制蛋白激酶C活性

季少平;药立波;韩月恒;刘新平;苏成芝

摘要: 目的 鉴定表达guanine-nucleotide-releasing factor (GRF)的pleckstrin homology (PH)结构域与谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白的可溶性,并进一步检测该重组蛋白与蛋白激酶C(PKC)的结合及对PKC活性的影响. 方法 将表达GRF的PH结构域与GST融合蛋白的菌体经超声裂解,上清中的融合蛋白用琼脂糖珠锚定纯化. Western blot检测融合蛋白与PKC的结合,以PKC活性检测试剂盒测定结合后PKC的活性变化. 结果 获得信号分子GRF的PH结构域-GST融合蛋白的可溶性表达. Western blot结果表明,GRF的PH结构域可在体外与PKC结合.PKC活性实验显示,GRF的PH结构域抑制PKC活性. 结论 GRF的PH结构域可在体外与PKC结合并对PKC的活性具有下调作用.

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