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人类髓样分化蛋白-2的原核表达

徐发良;顾长国;胡承香;李磊

摘要: 目的:在大肠杆菌DH-5α中表达人类髓样分化蛋白-2(human myeloid differentiaton protein-2,hMD-2)与谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-s-transferase,GST)的融合蛋白(GST/hMD-2),并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理.方法:建立GST/hMD-2表达菌,在不同温度下以不同浓度IPTG诱导不同时间后采样,用SDS-PAGE分析各种组合条件下融合蛋白的表达量和溶解性;用Western-Blot鉴定融合蛋白免疫性;用尿素变性和透析法对融合蛋白进行初步纯化.结果:在37℃经0.4 mmol/L IPTG诱导4 h后,GST/hMD-2可获高表达量(约占菌体总蛋白的20%),未见可溶性表达;Western-Blot证实GST/hMD-2能与抗MD-2单克隆抗体特异性结合;GST/hMD-2溶于8 mol/L尿素,梯度透析后纯度提高至40%.结论:hMD-2可在大肠杆菌DH-5α中与GST融合表达.

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