榄香烯和姜黄素诱导晶状体上皮细胞凋亡的体外研究
摘要： 目的 探讨榄香烯(Ele)和姜黄素(Cur)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的诱导效应及其机制.方法 将培养的牛LEC分别与160 μg/mL Ele和20 μg/mL Cur在CO2培养箱中共同孵育8,16,24,48,72 h,通过透射电子显微镜观察LEC超微结构;采用流式细胞术(FCM)测定LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位(ΔΨm).结果 LEC分别与Ele和Cur共同孵育后,电子显微镜下可观察到细胞核染色质凝集、固缩、边集、核碎裂等,均呈现典型的细胞凋亡的形态学改变.FCM分析可见典型的凋亡亚G1峰,提示细胞核内DNA含量下降,并随药物作用时间的延长而加强.FCM检测发现细胞质出现线粒体ΔΨm下降,且在药物作用早期已发生变化.结论 Ele和Cur能显著诱导LEC凋亡;细胞核内DNA含量下降、细胞质内线粒体ΔΨm降低,分别是Ele和Cur诱导LEC凋亡的细胞核和细胞质途径.线粒体ΔΨm下降是Ele和Cur诱导LEC凋亡的早期事件.
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雷公藤内酯醇对小鼠H22腹水瘤细胞凋亡及PD-L1表达的影响
目的 探讨雷公藤内酯醇诱导H22腹水瘤细胞凋亡以及作用机制.方法 采用腹腔注射肝癌H22细胞建立小鼠腹水瘤模型,80只成模小鼠随机分为对照组、雷公藤内酯醇低、中、高剂量(0.05,0.1,0.2 mg/kg)组,每组20只.观察小鼠体质量变化、生存期;计量腹水体积及计数腹水内肿瘤细胞数;流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的变化.结果 与对照组比较,雷公藤内酯醇3个剂量组小鼠的体质量增长缓慢,生存期中位数均有显著延长(P<0.01);雷公藤内酯醇低、中、高3个剂量组的腹水体积以及每毫升中的肿瘤细胞数均显著低于对照组(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,不同剂量的雷公藤内酯醇可以显著诱导H22细胞凋亡并下调H22细胞PD-L1的表达(P<0.05,P<0.01).结论 雷公藤内酯醇可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制PD-L1表达,发挥抗肝肿瘤的作用.
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磷掺杂碳量子点的分离及其光学性能研究
目的 合成并分离磷掺杂碳量子点.方法 以果糖和膦甲酸钠为前驱体水热法合成磷掺杂碳量子点,对洗脱条件进行优化,收集不同洗脱条件下得到的碳量子点样品,并进行紫外-可见光谱、荧光光谱和红外光谱表征以及量子产率的测定.结果 随着碳量子点极性的增大,碳量子点的发射波长逐渐红移,分离后的碳量子点与未分离的碳量子点混合液具有明显的光学性能差异.结论 所合成的碳量子点产物可通过硅胶柱层析分离出具有不同极性及光学性能的碳量子点.
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Ac-SDKP调节Rac1信号抑制皮肤肌成纤维细胞的转化和迁移
目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过阻断小G蛋白Ras相关的C3肉毒素底物(Rac1)信号,抑制转化生长因子β1(T G F-β1)介导的皮肤肌成纤维细胞转化的机制.方法 原代培养大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞,分为空白对照组、TGF-β1诱导组及Ac-SDKP预处理组.划痕实验检测细胞迁移能力,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Rac1蛋白的表达,Western-blot法检测α-SMA、血清应答因子(SRF)、心肌蛋白相关转录因子(MRTF-A)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及Rac1蛋白的表达.结果 细胞划痕实验显示,TGF-β1诱导组与空白对照组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,Ac-SDKP预处理组与TGF-β1诱导组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离减小.免疫细胞化学法检测结果显示,TGF-β1诱导组α-SMA和Rac1的阳性表达较空白对照组增强,而Ac-SDKP预处理组可明显抑制α-SMA和Rac1的阳性表达.TGF-β1诱导组的α-SMA,SRF,MRTF-A,ColⅠ及Rac1蛋白表达均较空白对照组明显上调,Ac-SDKP预处理组的蛋白表达较TGF-β1诱导组下降(P<0.05).结论 Ac-SDKP能够阻断Rac1信号,抑制TGF-β1介导的皮肤成纤维细胞迁移能力的提高和肌成纤维细胞转化.
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circ-ITCH表达水平与上皮性卵巢癌患者临床病理特征及预后的关联及对卵巢癌细胞增殖和凋亡作用的影响
目的 评估癌组织环状RNA-ITCH(circ-ITCH)的表达水平与上皮性卵巢癌(EOC)的临床病理特征及总体生存期(OS)的关联,并探讨circ-ITCH对EOC细胞增殖及凋亡的影响.方法 EOC患者122例,采集癌及癌旁组织样本.采用qPCR法检测circ-ITCH表达量.将NC1(+)、circ-ITCH(+)、NC2(-)及circ-ITCH(-)质粒分别转染进EOC的SKOV3细胞后,分别采用CCK-8和AV/PI实验检测细胞增殖和凋亡情况.结果 与癌旁组织[1.570(1.077～2.598)]比较,circ-ITCH在癌组织中[0.576(0.262～1.063)]的表达水平较低(P<0.001).circ-ITCH与病理分级(P=0.008)、肿瘤大小(P=0.023)及FIGO分期(P<0.001)呈负相关.Kaplan-Meier曲线显示,circ-ITCH的高表达水平患者比低表达水平患者有更长的OS(P=0.002).单元和多元Cox′s回归分析显示,circ-ITCH高表达水平(P=0.012)能独立预测EOC患者较好的OS.CCK-8实验显示,转染48 h后,细胞增殖circ-ITCH(+)组比NC1(+)组显著减少(P<0.05),circ-ITCH(-)组比NC2(-)组显著增加(P<0.05);AV/PI实验显示,细胞凋亡率circ-ITCH(+)组比NC1(+)组明显增加(P<0.05),circ-ITCH(-)组比NC2(-)组明显减少(P<0.05),表明ITCH具有抑癌作用.结论 癌组织circ-ITCH与EOC手术患者的病理分级、肿瘤大小及FIGO分期均呈负相关,而与OS呈正相关;circ-ITCH可减少EOC细胞增殖,并增加细胞凋亡.
关键词： 环状RNA-ITCH 卵巢肿瘤 存活率 细胞增殖 细胞凋亡 -
干细胞相关基因Nestin在胃神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义
目的 研究干细胞相关基因Nestin在胃神经内分泌肿瘤中的表达,分析其与肿瘤生物学特点及患者生存时间的关系.方法 应用组织芯片及免疫组织化学法,检测91例胃神经内分泌肿瘤标本及正常组织中Nestin的表达,并结合胃神经内分泌肿瘤不同病理亚型、临床病理参数和患者预后进行分析.结果 91例中,27例(29.67％)胃神经内分泌癌表达Nestin,而胃神经内分泌瘤及正常胃黏膜组织均不表达Nestin.Nestin表达与胃神经内分泌癌患者的性别、肿瘤浸润深度、脉管侵犯及TNM分期有显著相关性.Kaplan-Meier曲线显示,Nestin阳性表达的胃神经内分泌癌患者生存率显著低于阴性表达组.结论 Nestin在胃神经内分泌肿瘤不同的病理亚型间差别表达,Nestin的表达可能促进了胃神经内分泌癌的发生发展,并可能作为胃神经内分泌癌的干细胞标记物用于判断预后.
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人主动脉夹层血管平滑肌细胞的培养和鉴定
目的 建立人主动脉夹层(AD)血管平滑肌细胞(VSMC)体外培养的方法.方法 以AD患者手术时切除的血管为原料,用组织块贴壁法进行VSMC的体外原代和传代培养,倒置显微镜观察细胞的生长情况,考马斯亮蓝染色、α-S M A及Ⅷ因子免疫荧光染色和透射电镜检测鉴定细胞.结果 7～10 d原代细胞从组织块边缘迁移出来,3～4周细胞生长至融合,可进行传代.原代和传代的细胞生长良好,倒置显微镜下见细胞呈长梭形,有多个突起.细胞呈"峰谷状"生长,具有典型的VSMC特征.考马斯亮蓝染色和透射电镜下均可见细胞内有大量沿长轴生长的肌丝,α-SMA免疫荧光染色强阳性,Ⅷ因子免疫荧光染色阴性,证明所培养的细胞为VSMC.细胞传代至第6代以后开始出现老化现象.结论 应用组织块贴壁培养的方法可成功地在体外培养人AD的VSMC,为今后研究AD的发病机制提供良好的实验基础.
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骨质疏松大鼠骨髓基质细胞膜片制备过程中纤维连接蛋白表达检测
目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BM SC)膜片体外构建过程中纤维连接蛋白(FN)的表达情况.方法 体外分离培养骨质疏松大鼠BMSC,采用含50μg/mL维生素C的培养基连续培养构建细胞膜片,通过倒置显微镜和组织学染色对细胞膜片进行形态学观察;利用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测细胞外基质中FN在基因和蛋白水平的表达情况.结果 采用含维生素C的培养基连续培养可获得含多层细胞及丰富胞外基质的BMSC细胞膜片.免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测结果显示所构建的细胞膜片高表达FN.结论 以浓度为50μg/mL的维生素C培养基连续培养可成功构建骨质疏松大鼠BM SC细胞膜片,膜片富含FN,有望应用于骨质疏松状态下牙槽骨缺损的治疗.
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降钙素原在非感染的终末期肝病患者中的表达水平及影响因素
目的 探讨血清降钙素原(PC T)在非感染的终末期肝病患者中的表达水平及影响因素.方法 收集终末期肝病(失代偿期肝硬化或肝衰竭)且未合并感染的患者207例,回顾性分析患者的临床资料.同时以非感染的代偿期肝硬化患者43例作为对照组,单因素方差分析比较各组患者的PCT基线水平,Spearman等级相关分析法判断PC T水平与各指标的相关性.结果 代偿期肝硬化组、失代偿期肝硬化组及肝衰竭组患者的血清PC T水平分别为(0.08±0.013),(0.20±0.019)及(0.76±0.051)ng/m L,3组间比较差别有统计学意义(F=83.646,P<0.001).相关分析显示,PCT水平与代偿期肝硬化、终末期肝病非感染患者的总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、终末期肝病模型(MELD)评分(r分别为0.741,0.669,0.725及0.691,P<0.001)均呈正相关关系:失代偿期肝硬化组中,血清PCT水平与TBIL,ALT,AST及MELD评分的相关系数分别为0.492,0.468,0.569及0.202(P<0.05);肝衰竭组中,血清PCT水平与ALT,AST,MELD的相关系数分别为0.365,0.329,0.262(P<0.05);代偿期肝硬化组中,PCT水平与ALT及AST的关系差别并无统计学意义.结论 在不伴随感染的终末期肝病患者中,血清PC T表达水平升高,并与肝功能指标呈正相关.当PC T用于这类人群进行感染的诊断时,要考虑肝功能状态对PC T基线水平的影响.
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ZEB1及Nestin在高级别胶质瘤初治及配对复发标本中的表达及临床意义
目的 研究ZEB1及Nestin在高级别胶质瘤初治标本及配对复发标本中的表达,并探讨其与无进展生存期(PFS)的关系.方法 回顾性分析39例接受手术全切及规范化放化疗的高级别胶质瘤术后患者的临床资料,39例均为复发且再次手术病例.免疫组织化学检测初治及复发标本中ZEB1及Nestin的表达水平,用平均光密度代表其表达水平,并通过Spearman法分析初治标本中两个标记物表达的相关性.根据平均光密度将39例患者分为高表达组和低表达组,并通过Kaplan-Meier单因素分析法及Cox比例风险模型多因素分析法,研究初治标本中ZEB1及Nestin表达与患者PFS的关系.结果 ZEB1及Nestin在高级别胶质瘤复发标本表达的平均光密度明显高于初治标本[(0.703±0.176)v s(0.609±0.133),P<0.01;(0.375±0.0966)v s(0.333±0.0710),P=0.014],初治标本中ZEB1表达与Nestin表达呈正相关.单因素分析显示,年龄、卫星灶、坏死、ZEB1表达及Nestin表达与规范化治疗后高级别胶质瘤的PFS有相关性;多因素分析显示,ZEB1表达为影响高级别胶质瘤的独立因素(95％CI:3.016～19.194,P<0.001).结论 高级别胶质瘤细胞中ZEB1及Nestin的表达,复发者较初治者明显增高,这可能是复发者对治疗更加耐受且更具有侵袭性的重要原因之一.初治标本中,ZEB1可用于评估高级别胶质瘤规范化治疗后的PFS.
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咪唑并[1,2-a]喹喔啉衍生物的合成及其体外抗乳腺癌活性研究
目的 合成咪唑并[1,2-a]喹喔啉衍生物,并检测其体外抗乳腺癌活性研究.方法 以2-氯甲基苯并咪唑和N-4-甲苯磺酰基-2-氨基碘苯为底物,通过微波辐射催化法合成咪唑并[1,2-a]喹喔啉衍生物.细胞划痕实验和MTT法测定合成的化合物的体外抗肿瘤活性.结果 化合物c和e的半数抑制浓度均低于其他吡咯并[1,2-a]喹喔啉化合物.结论 化合物c和e均具有抗肿瘤活性,可作为针对SKBR3和MCF-7细胞开发出耐受性好、毒副作用小的新型抗肿瘤药物.
