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大鼠嗅球被膜细胞的培养和鉴定

李成仁;蔡文琴;苏炳银

摘要: 目的:为了培养大鼠嗅球被膜细胞,为脊髓损伤后的移植治疗研究提供细胞供体,我们应用了体外培养和免疫细胞化学等方法,对大鼠嗅球被膜细胞的培养纯化和免疫学特性进行了研究.方法:取新生的Wast er大鼠10只,在无菌环境下将嗅球暴露并取下,浸泡于D-Hank's液中,将嗅球外层的嗅神经层剥下,用D-Hank's液洗3次,用0.125%胰酶37℃消化20分钟 ,用含10%胎牛血清和10%马血清的DMEM终止消化后,再用同样的培养基重悬组织,用吸管轻轻吹打组织,形成细胞悬液,用同样的培养基调节细胞浓度,接种于涂有多聚赖氨酸的培养瓶和盖玻片上,放入5%CO2、37℃中培养,培养3天后换液,加入10-6m o l/L的阿糖胞苷筛选细胞,作用48小时后换液,加入12ug/ml牛垂体提取物刺激细胞生长.用免疫细胞化学方法进行GFAP、Vimentin、S-100和P75NG FR染色.结果:嗅球被膜细胞为双极或多极的细胞,轮廓清晰,立体感强,突起细长;免疫细胞化学染色显示,嗅球被膜细胞对GFAP、Vimentin、S-100和P75 NGFR呈免疫阳性.讨论:哺乳动物的嗅神经系统是可以再生的中枢神经系统,其再生嗅神经元的突起在嗅球被膜细胞的诱导下,从周围的嗅上皮到达中枢的嗅球.研究显示,嗅球被膜细胞可以分泌多种神经营养因子和轴突生长刺激物质,能促进轴突的再生和髓鞘的形成 ,对中枢再生尤其是脊髓损伤的再生具有很强的促进作用.因此,加强对嗅球被膜细胞神经生物学特性的研究非常重要.

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