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VEGF在精索静脉曲张大鼠睾丸和附睾中表达的研究

张秋养;邱曙东;葛玲

摘要: 血管内皮生长因子(VEGF)是新生血管形成的主要调控者之一.VEGF不但作用与内皮细胞 ,而且也作用于非内皮细胞,它可能对男性生殖具有调节作用.精索静脉曲张(VC)是男性不育的一个主要原因,VC的睾丸流体动力学和血管系统有所改变,睾丸和附睾中VEG F的表达是否会有改变,VEGF在精索静脉曲张性不育中是否起作用等至今未见报道.本研究通过免疫组织化学方法对正常大鼠和VC大鼠睾丸和附睾中VEGF的定位及变化作了研究.材料和方法:建立青春期大鼠左侧精索静脉曲张动物模型,并进行了验证.取曲张组及对照组大鼠双侧睾丸和附睾,用Bourn′s液固定24hr(4℃),脱水 ,石蜡包埋.切片5-6μm,常规脱蜡至水.分别作HE染色和免疫组织化学染色.免疫组织化学染色:1.用1mM EDTA(pH8.0)煮沸切片10min、室温冷却 20min以修复抗原.2.用3%H2O2室温10min,封闭内源性过氧化物酶 ,用0.01M PBS(pH7.4)洗4次,10min/次.3.正常血清室温封闭 20hr.4.用0.01mg/ml多克隆兔抗人重组体VEGF165抗体4℃孵育2 4hr,阴性对照切片用不含一抗的PBS缓冲液孵育,PBS洗4次.5.用生物素标记羊抗兔IgG(二抗)室温孵育2小时,洗同上.6.用抗生物蛋白链菌素过氧化物酶室温孵育30min,洗同上.7.DAB显色5-6min,PBS洗同上,双蒸水洗.8.常规脱水,透明,封片.2.结果:VEGF免疫组织化学阳性反应呈棕褐色,在正常组和VC组大鼠的睾丸和附睾中均有表达.免疫组织化学反应具明显的特异性,在阴性对照组中,VEGF反应为阴性.正常组大鼠睾丸的VEGF蛋白定位于间质细胞和支持细胞,在一定发育阶段生精细胞中也有明显的VEGF免疫反应活性,而且在曲细精管不同区段的生精细胞组合中其表达有明显的差异.在正常大鼠附睾中,我们首次发现在附睾管的始段、头部、体部和尾部,以及输精管上皮中 ,VEGF阳性的细胞数和活性有明显的差别.VEGF主要定位于附睾管上皮主细胞,在基细胞和一些大的晕细胞(巨噬细胞)中也可见到.在一些管周的肌样细胞中也有VEGF阳性反应.在附睾管固有层内,毛细血管和小血管的内皮为VEGF阴性,而一些血管的管周肌细胞中为阳性.精索静脉曲张大鼠的睾丸和附睾中,VEGF的免疫反应活性有明显改变,曲张时间不同, 其表现也有差异,左右侧睾丸和附睾的VEGF免疫反应强弱也不同.

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