益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468的增殖抑制作用及其对Akt/mTOR信号通路的影响
摘要： 目的 探讨益气扶正复方(简称复方)联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用及Akt/mTOR信号通路的影响.方法 高效液相色谱法(HPLC)制备益气扶正复方药物,以MTT比色法分别检测10,20,40,80,160 mg· mL-1复方药物及1,10,100,1000 nmol· L-1依维莫司(Everolimus) 12,24,48 h对MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用;分别运用IC50浓度的复方40 mg· mL-1与Everolimus 100 nmol· L-1单独及联合干预MDA-MB-468乳腺癌细胞48 h,观察其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测其对细胞Akt/mTOR信号通路的影响.结果 复方及Everolimus均呈剂量、时间依赖性地抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,选择IC50浓度的复方40 mg· mL-1与Everolimus 100 nmol· L-1单独及联合干预细胞,联合用药组显著抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞的增殖,同时联合用药组抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达.结论 复方与Everolimus均能抑制MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,两药联用效果更为显著,其作用机制可能与复方与依维莫斯联用抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达有关.
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栀子-连翘药对清热、利胆作用研究
目的：观察栀子-连翘药对配伍前后对发热型大鼠清热、利胆方面的影响，证明其配伍可以明显增强清热、利胆作用。方法：采用背部皮下注射干酵母混悬液法建立大鼠发热模型。制备栀子、连翘、栀子-连翘药对水提取物冻干粉，临用前水溶解灌胃给药。将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药对照组及中药给药组，中药给药组分为栀子、连翘单药给药组及栀子-连翘药对给药组。中药提取物溶液浓度为10 mL·kg-1（相当于单味药生药量3 g·kg-1），阳性药对照组给药浓度为10 mL·kg-1，空白组、模型组灌胃给予等量的生理盐水。除正常组大鼠外，各组大鼠背部皮下注射15%的干酵母悬液10 mL·kg-1，建立大鼠发热模型。电子体温计记录大鼠0、1、4、5、6、7、8 h体温，同时收集1-1、1-2、2-4、4-6、6-8、8-12、12-24 h胆汁，观察配伍前后发热大鼠的体温和胆汁量变化。结果：栀子、连翘及其药对配伍均具有一定的降低大鼠体温的作用，二药配伍后降温效果优于单用栀子或连翘；栀子-连翘药对能够降低发热大鼠的体温（P<0.05或P<0.01），对正常大鼠的体温有一定影响；栀子与连翘配伍具有一定的促进发热大鼠胆汁分泌的作用，二药配伍后胆汁分泌效果明显优于单用栀子（P<0.05）。结论：栀子与连翘配伍在大鼠发热模型上的降温能力优于单药应用，但无显著性差异；而在促进胆汁分泌方面具有显著性差异，说明该药对配伍后利胆作用增强。
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土知母药材中射干苷定性与定量分析研究
目的：建立土知母药材中射干苷定性与定量分析方法。方法：采用TLC法对土知母药材中射干苷进行定性鉴别；HPLC法对土知母药材中射干苷进行含量测定。色谱柱：Diamonsil C18（200 mm ×4.6 mm，5μm），流动相：乙睛-0.2%磷酸溶液（20：80），流速：1.0 mL·min-1，波长：265 nm，柱温：25益。结果：土知母药材定性方法专属性强，无其它成分干扰；射干苷在0.12~2.22μg范围内与峰面积响应值呈良好的线性关系，平均加样回收率为100.96%。结论：本法简便可行，重复性好，可用于土知母药材的质量控制。
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不同产地黄芪HPLC指纹图谱的聚类分析及相似度评价
目的:通过建立黄芪药材HPLC指纹图谱,评定不同产地黄芪中化学物质的含量特点,为科学评价黄芪的内在质量提供参考.方法:采用RP-HPLC法,梯度洗脱,测定了10批样品,采用聚类分析及相似度的计算对药材进行鉴别,并对方法进行了评价.结果:根据聚类分析结果,将两年生黄芪药材分为3类,建立了黄芪药材的RP-HPLC指纹图谱共有模型,找出了较大的12个共有峰,指认出其中2个峰分别为黄芪甲苷和芒柄花素.结论:本法简便、快捷、重现性好,建立的黄芪指纹图谱相似度好,且区分性强,为黄芪的质量控制及评价提供了依据.
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咖啡渣提取物的急性毒性与抗炎作用研究
目的：初步考察咖啡渣提取物的急性毒性与抗炎作用。方法：采用小鼠大耐受剂量法观察咖啡渣提取物的急性毒性作用，分别用二甲苯与醋酸诱导小鼠急性炎症模型，连续7天分别灌胃给予咖啡渣提取物1.00，2.00，3.00 g·kg-1（按生药量计）。重量法检测小鼠耳肿胀率，伊文思蓝法检测小鼠腹腔毛细血管通透性，观察咖啡渣对炎症小鼠的抗炎作用。结果：咖啡渣提取物的小鼠大耐受量为8.60 g·kg-1（按生药量计），咖啡渣提取物3.00 g·kg-1能降低二甲苯导致的小鼠耳肿胀率（P<0.05），抑制醋酸导致的小鼠毛细血管通透性增加（P<0.05）。结论：咖啡渣提取物对小鼠具有一定的抗炎作用。
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利用GIS分析中药材牛蒡子的生态适宜性
本文利用多重线性回归的方法得到牛蒡子品质指标的预测模型,利用GIS分析,得到牛蒡子不同品质指标在全国的分布,进而综合利用适宜性评价模型,从而得到牛蒡子适宜性在全国的空间分布,得到牛蒡子不同品质指标在全国的分布.结果表明,影响牛蒡子品质指标的因子主要是7月平均温度和高温度、年均温、年降水等,全国牛蒡子适宜分布区主要在东北地区、华南地区,四川云南、西北部分地区等地区,不适宜生长区主要分布在西藏地区、青海省、西北部分地区.
关键词： 适宜性GIS多重线性回归模型 -
火焰原子吸收光谱法测定鸡矢藤中微量元素
目的:测定鸡矢藤中微量元素的含量.方法:采用浓硝酸-高氯酸(4:1)的混合溶液对样品进行消解,火焰原子吸收光谱法测定鸡矢藤中微量元素(Fe,Cu,Zn,Mn)的含量.结果:鸡矢藤中Fe,Cu,Zn,Mn含量依次为493.3,6.925,82.33,66.42 μg·g-1,各元素含量由高到低的顺序依次为Fe>Zn>Mn>Cu;方法的平均回收率为100.4%.结论:鸡矢藤中含有较为丰富的Fe,Cu,Zn,Mn,测定结果为鸡矢藤药理作用的研究提供了数据参考.
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Box-Behnken响应面法优化疏风定喘颗粒黄芩组的提取工艺研究
目的:利用Box-Behnken响应面法对疏风定喘颗粒黄芩组的提取工艺进行优化.方法:以黄芩苷、白花前胡甲素和固含转移率为考察指标,在单因素试验的基础上,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对提取工艺的影响,再结合Box-Behnken中心组合设计试验,进一步优化醇提工艺参数.结果:单因素试验结合Box-Behnken响应面法优选黄芩组的佳工艺为:8倍量70%乙醇,提取两次,每次1.0 h,在此条件下黄芩苷、白花前胡甲素的转移率分别达到89.57%、87.90%,固含转移率为32.35%.结论:单因素试验结合响应面法可用于优化疏风定喘颗粒黄芩组的提取工艺,该工艺稳定可行,为工业化生产提供科学的依据.
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吸波面积法对组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中多成分体外释放度的研究
目的:通过吸波面积法对组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中多成分体外释放度进行测定,探讨中药复杂体系多成分体外释放度测定的可行性.方法:配制槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇混合对照品溶液,经紫外-可见分光光度法在200-600 nm下进行全波长扫描,通过Origin软件拟合并计算吸光度-波长曲线下面积(简称吸波面积,Area under the Absorbance-wavelength Curve,AUAWC),采用吸波面积法对组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中混合总药物的释放量进行测定.同时,采用高效液相色谱法分别测定槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇各单一成分的体外释放特性,并对两种方法的结果进行比较和分析.结果:吸波面积法和高效液相色谱法测得组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中混合总药物、槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇在酸性介质0.1 mol·L-盐酸中2h胶囊壳无破损,稳定性良好,不释放;在0.2 mol· L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中120 min释药完全,累积释放百分率分别为99.47％、90.87％、95.65％、98.49％,混合总药物不同时间的累积释放量与槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇三者药物累积释放量之和接近.结论:吸波面积法用于组分中药白花蛇舌草肠溶的体外释放度方法科学、可行、方便,可用于中药复杂体系多成分体外释放度的测试,其与高效液相色谱法的联合使用为西药复方、组分中药以及复杂体系的中药复方制剂的体内外相关性研究提供了科学思路和可行途径.
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人参皂苷对昼夜颠倒应激大鼠能量代谢干预作用的代谢组学研究
目的:利用代谢组学技术研究光照改变造成昼夜颠倒应激对大鼠能量代谢的影响,同时评价人参皂苷的干预作用.方法:大鼠24只分为正常对照组、昼夜颠倒模型组和人参皂苷干预组(100mg·kg-1),适应1周后,对模型组和人参皂苷干预光照进行日/夜颠倒8天,称取实验前及开始后每天各组大鼠体重,分别称取实验前及第8天各组白天及夜晚食量.第8天结束后,取大鼠血清TMCS衍生后,进行GC-MS分析,采用偏小二乘判别分析法研究模型组与正常组之间的代谢物组差异,评价人参皂苷的干预作用.结果:昼夜颠倒应激对大鼠体重及食量均有促进升高作用(P<0.05),且食量与正常组相比呈昼夜颠倒趋势;人参皂苷一定程度上抑制应激作用的升高趋势.代谢组学研究表明,昼夜颠倒应激与机体能量代谢、蛋白质吸收与降解、脂肪酸代谢、胆固醇代谢等途径改变有关,人参皂苷具有改善作用.结论:人参皂苷可改善昼夜颠倒造成的代谢物质改变,其机制可能是通过调节兴奋性和抑制性神经递质等上游代谢通路,继而改变下游的物质变化.
关键词： 昼夜颠倒 GC-MS 代谢组学 人参皂苷 偏最小二乘判别分析法 -
大孔吸附柱色谱法优选接骨木的纯化工艺
目的：优选接骨木的纯化工艺。方法：以莫诺苷为指标，采用不同型号大孔吸附树脂优选接骨木根皮乙醇提取物的佳纯化工艺。上样量小于1、250（莫诺苷、树脂）的接骨木醇提取物，水洗脱通过AB-8型大孔吸附柱色谱，弃去20倍柱体积的水洗脱液，以10%乙醇完全洗脱，洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得接骨木总苷。结果：总苷中莫诺苷含量大于50%。结论：该提取工艺简单、可靠、重复性好，适用于工业生产。
