肺移植后闭塞性细支气管炎大鼠模型建立及其miRNA表达谱分析
摘要： 目的 探索建立大鼠原位气管移植模拟肺移植后闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis,OB)的病理生理过程,为研究肺移植后OB中microRNA (miRNA)表达谱分析提供理想的动物模型.方法 通过近交系大鼠原位气管移植,建立模拟肺移植后发生OB的动物模型.模型成功后使用HE染色对气管移植模型进行评估;提取移植气管组织进行microarray芯片检测,同时应用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)验证miRNAs芯片结果的可靠性.结果 成功建立了大鼠原位气管移植的模型26/30例(成功率为86.67％);术后4周移植气管病理检查提示“移植气管炎症细胞浸润和纤维组织增生”,模型OB的发生率为100％.miRNA芯片筛选出移植气管OB组织中表达上调15个和下调14个;验证其中显著上调miR-146a、miR-155和显著下调miR-451结果与检测结果具有较好的一致性.结论 原位气管移植能够稳定形成模拟肺移植后OB的气道阻塞性病变,可适用于肺移植后OB的miRNA表达谱分析研究的动物模型.
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环孢素A对高糖状态下七氟醚后处理大鼠心肌细胞保护作用的影响
目的 明确环孢素A(CsA)能否通过抑制线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,并维持线粒体形态恢复七氟醚后处理(SPostC)对高糖培养心肌细胞的保护作用.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分别在低糖与高糖浓度下培养48 h后接受缺氧复氧损伤.缺氧前给予CsA或者再灌注前给予SPostC,或二者联合应用,观察心肌细胞复氧后的死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)水平、线粒体形态改变及线粒体膜电位变化.结果 SPostC与CsA均降低了缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率,增加了缺氧/复氧损伤后的线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平(P＜0.05),二者联合并未进一步增强保护作用.高糖(35 mmol/L)加剧了心肌细胞缺氧/复氧损伤,高糖浓度下,上述保护作用均消失.与高糖组相比,SPostC、CsA及二者联合均未能降低缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率(P＞0.05),线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平变化差异也无统计学意义.结论 CsA和SPostC均能够通过调节线粒体形态抵抗缺氧/复氧损伤,高糖时保护作用消失,联合CsA无法恢复其保护效应.
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SD大鼠脊髓损伤后微环境中髓鞘相关抑制因子的表达
目的 观察SD大鼠在不同致伤势能的Allen's模型和脊髓全切模型微环境中不同时间点的髓鞘相关抑制因子表达.方法 选择125只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组25只,A组(假手术组),B组[20 g×5 cm,即致伤势能100 gcf (gram-cm force)],C组(20 g×10 cm,致伤势能200 gcf),D组(20 g×15 cm,致伤势能300 gcf)和E组(脊髓全切组).采用Western blotting印迹分析法,在制模成功后1d、5d、7d、14d、28 d观察大鼠脊髓损伤(SCI)组织中勿动蛋白-A(Nogo-A)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)等髓鞘相关抑制因子表达.结果 整个实验中大鼠死亡24只(16.67％);B、C、D、E组SCI后1d可见Nogo-A、MAG、OMgp表达,Nogo-A与MAG表达于SCI后7d达峰值,28 d恢复到假手术组水平;SCI后1d可见髓鞘中OMgp表达,5d达峰值,28 d恢复至假手术组水平.结论 Nogo-A、MAG、OMgp在SCI后普遍呈现高表达,并在SCI后5～7 d达到峰值.
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栀子黄色素类单体对糖尿病小鼠降血糖作用
目的 探讨栀子黄色素类单体对糖尿病小鼠降血糖的作用.方法 采用四氧嘧啶制备糖尿病小鼠模型,测定栀子黄色素类单体对淀粉负荷和蔗糖负荷糖尿病小鼠血糖的影响.结果 西红花苷Ⅰ 100 mg/kg、西红花酸100 mg/kg和西红花苷Ⅲ 50 mg/kg可显著降低淀粉负荷糖尿病小鼠血糖;西红花苷Ⅰ 100 mg/kg、西红花酸50 mg/kg、100 mg/kg和西红花苷Ⅲ 100 mg/kg可显著降低蔗糖负荷糖尿病小鼠血糖.结论 栀子黄色素类单体西红花苷Ⅰ、西红花酸和西红花苷Ⅲ对淀粉负荷和蔗糖负荷糖尿病小鼠均有降血糖作用.
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鼠痘病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立
目的 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立一种鼠痘病毒(ECTV)的可视化快速检测方法.方法 通过序列分析选择3段ECTV序列保守区域设计了9套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选佳引物组合,优化反应条件,建立了对ECTV核酸进行特异性扩增的LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果.对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估,并对人工感染样品进行了检测.结果 该方法在63℃恒温下作用60 min,ECTV DNA获得了高效特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;低检出量为530 fg/μL,是常规PCR的103倍,加入目测荧光染料判断结果与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致.结论 建立的ECTV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏和操作简单的特点,或具有良好应用前景.
关键词： 鼠痘病毒(ECTV) 环介导等温扩增技术(LAMP) 实时 快速检测 -
利用SCID小鼠建立子宫内膜异位症模型的方法探讨
目的 将人子宫内膜碎片经腹腔注入SCID小鼠体内以建立SCID小鼠子宫内膜异位症(EMT)模型,并观察其成模情况.方法 取56～62日龄CB-17 SCID雌性小鼠18只,体质量17～25 g,腹部常规消毒后用16号针头于小鼠下腹正中行腹腔穿刺,注入含子宫内膜碎片的磷酸缓冲液(PBS) 0.2 mL,含内膜碎片8～10块.种植第2日给予30 mg/kg体质量的苯甲酸雌二醇于小鼠腿部肌肉注射,以利于子宫内膜生长种植.结果 造模4周后见小鼠形态消瘦,部分呈病态,行手术打开腹腔见散在不典型内异病灶,取病灶检测未见典型的子宫内膜异位症病理学变化.结论 腹腔注射法建立SCID小鼠EMT模型不理想,成模率低,可操作性较低,且其易形成炎性囊肿,影响盆腔微环境,异体移植组织较小,实验过程复杂,手术操作困难,或存在腹腔注射的组织失活,导致成模率低.
关键词： 子宫内膜异位症(EMT) 腹腔注射法 小鼠 疾病模型 -
弓形虫生物检测靶标miR-191的鉴定
目的 建立弓形虫miRNA探针定量检测法.方法 采用高通量测序技术筛选出不同弓形虫虫株间表达量高且差异不明显潜在靶标,并对其不同时间点(0 d、1d、3d、5d、7 d)外周血的表达及诊断效能进行研究.结果 高通量测序表明,miR-252、miR-3641、miR-509-5p、miR-1285、miR-140、miR128-1、miR-191、miR-3426具有作为血液中弓形虫生物检测靶标的潜在性.通过对感染弓形虫RH株和M49株小鼠的miR-191诊断效能分析后表明,敏感性分别为85％和95％,特异性均为100％.根据miR-191制备纳米金探针,对不同时间点感染弓形虫RH株和ME49株大鼠的血液靶标miR-191进行定量分析表明,感染后7d内感染弓形虫miR-191表达情况相对稳定.制作弓形虫RH株、弓形虫ME49株、伯氏疟原虫、约氏疟原虫、隐孢子虫,鼠肝炎病毒和金黄色葡萄球菌感染的小鼠模型,与对照组比较分析表明,miR-191在感染弓形虫RH株和ME49株的小鼠模型中出现高表达,而在感染细菌、病毒和其它寄生虫的小鼠模型中均未出现表达.结论 弓形虫miR-191具有作为检测靶标的应用价值.
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野生东方田鼠4种成纤维细胞培养上清对日本血吸虫童虫的体外杀伤效果
目的 为了明确野生东方田鼠4种成纤维细胞培养上清对体外培养的日本血吸虫童虫的杀伤效果.方法 以对数生长期的野生东方田鼠胚胎、皮肤、肺脏及腹腔成纤维细胞培养上清液(实验组)与血吸虫童虫共培养,以DMEM培养基为空白对照,以含体积分数20％的东方田鼠血清为阳性对照,96 h内观察与4种细胞培养上清共培养的童虫状态,统计死亡率.结果 与野生东方田鼠腹腔与肺脏成纤维细胞培养上清共培养72 h后,童虫出现死亡特征,表现为表膜皱缩,缢痕明显;96h后,虫体内容物模糊并溢出,与阳性对照组童虫死亡特征略有不同;野生东方田鼠皮肤、胚胎、腹腔和肺脏组织成纤维细胞培养上清共培养96 h的血吸虫童虫死亡率分别为8.30％±2.10％、9.30％±1.38％、17.20％±3.27％和15.10％±4.35％,与空白对照的童虫死亡率(7.70％±0.80％)相比表明,腹腔和肺脏成纤维细胞培养上清液对童虫具有明显杀伤效果(P＜0.05).结论 对数生长期的野生东方田鼠腹腔和肺脏成纤维细胞培养上清对日本血吸虫童虫的杀伤效果较明显.
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高脂高铁对大鼠脂代谢及肝功能的影响
目的 验证高脂高铁对大鼠脂代谢及肝功能指标的影响.方法 大鼠分为正常组、高脂组、高铁组、高脂高铁组、高脂去铁组,每组24只.分别自由摄取普通饲料和高脂饲料的同时,高铁组、高脂高铁组大鼠隔日肌肉注射右旋糖酐铁50 mg/kg;高脂去铁组大鼠处死前一个月尾静脉注射甲磺酸去铁铵30 mg/kg,3次/周;分别于干预后4个月、5个月、6个月选取8只大鼠,检测血清血清总胆固(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量.结果 与对照组比较,干预后4个月、5个月、6个月,高脂组、高脂高铁组、高脂去铁组的血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高,HDL-C水平降低(P均＜0.05);而高脂高铁组的TC、TG、LDL-C、ALT(4个月)、AST(5个月)水平明显高于高脂饲料组;与对照组比较高铁组ALT、AST水平显著升高;与高脂组比较,高脂高铁组ALT(4个月)、AST(5个月)水平升高.结论 高铁负荷可加剧高脂摄食所致的脂代谢异常.
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荷丹片对慢性非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的影响
目的 观察荷丹片对慢性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的影响.方法 采用灌胃给予高脂乳剂和高糖溶液制作NAFLD大鼠模型,取模型大鼠连续给药4周后,测其血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和肝脏组织还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、TCH、TG值及肝系数.结果 荷丹片3.53 g/kg、7.06 g/kg、14.12 g/kg均能显著降低NAFLD模型大鼠血清ALT、TCH和LDL-C,能显著增加其血清HDL-C;荷丹片7.06 g/kg、14.12 g/kg能显著降低其血清TG和肝组织MDA、TCH、TG,与模型组比较,差异有统计学意义.组织病理学检查,荷丹片7.06 g/kg、14.12 g/kg可减轻NAFLD模型大鼠肝细胞肿胀,脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度.结论 荷丹片能显著改善NAFLD模型大鼠血清和肝组织相关指标,可减轻NAFLD模型大鼠肝细胞肿胀,脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度.
关键词： 荷丹片 非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD) 大鼠 -
传统超声与超声二维斑点追踪技术对小鼠心肌梗死模型评价的比较
目的 通过传统超声与超声二维斑点追踪(STI)技术用于小鼠心肌梗死(MI)模型评估的不同特点进行分析比较,确定更精确和准确的技术检测手段.方法 16周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和MI模型组.采用相同参数设置的超声采集对照组小鼠和MI小鼠的心功能情况.运用传统超声方法记录小鼠左心室射血分数(EF％)和缩短分数(FS％),同时利用STI技术分析左室各节段在长轴和短轴上的运动速度、运动位移、应变和应变率4种参数.分析对比传统超声与STI技术对小鼠心功能的评价效果.结果 传统超声EF％与FS％能够反映出小鼠发生MI情况,而STI技术不仅能反映小鼠MI情况,还具有模拟心肌各节段运动能力和力学属性的特点,比传统超声更为敏感,反映出的信息更多.结论 STI技术可作为传统超声方法的补充手段,可使小鼠MI模型获得更有效评估.
关键词： 心肌梗死(MI)模型 高频超声 二维斑点追踪(STI) 心肌应变 心肌应变率
