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黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用
目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制.方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1～3d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组.预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L-1)及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L-1).BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况.结果:与空白组比较,各给药组(10～40μmol·L-1)原代心肌细胞的活力上调(P<0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P<0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P<0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P<0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P<0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P<0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P<0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P<0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P<0.05).结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用.
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基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础
目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础.方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分；体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响.结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物；与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P＜0.05,P＜0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P＜0.05,P＜0.01),明显抑制细胞凋亡.结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础.
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抗心律失常肽10对柯萨奇B3病毒感染小鼠原代心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响
目的：建立原代心肌细胞柯萨奇B3病毒（CVB3）感染性病毒性心肌炎的模型，使用抗心律失常肽10(AAP10)对该疾病模型进行干预，观察其对小鼠原代心肌细胞及缝隙连接蛋白43（Cx43）的影响。
方法：选取出生1～3天的BALB/C小鼠10只进行原代心肌细胞培养，分别用不同剂量的抗心律失常肽10的培养液进行干预100倍组织细胞培养半数感染量（TCID50）CVB3感染的心肌细胞，将原代小鼠心肌细胞分为细胞对照组、病毒对照组、低剂量干预组、高剂量干预组4组，每组8孔，通过蛋白免疫印迹法测定细胞缝隙连接蛋白43的表达水平。
结果：缝隙连接蛋白43相对表达水平低剂量干预组[（71.46±2.69）%]和高剂量干预组[（83.56±3.74）%]明显高于病毒对照组[（44.92±4.49）％]，随着干预剂量增加，其缝隙连接蛋白43相对表达水平进一步显著增加，差异均有统计学意义（P均<0.001）。
结论：抗心律失常肽10可保护心肌细胞，增加缝隙连接蛋白43的表达，减少病毒性心肌炎的心肌损害。 -
用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的研究
目的探索用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的方法.方法用胶原、Matrigel、2倍DMEM分别与含0.04%EDTA的0.25%胰酶制备的乳鼠原代心肌细胞(实验组)和0.1%胰酶制备的原代心肌细胞(对照组)混合,注入环形槽内形成心肌条带,一周后行力学拉伸继续培养一周.常规HE染色等对组织工程化心肌组织,即心肌条带进行评价.结果心肌条带出现自发性跳动,HE染色显示与正常成年大鼠心肌组织类似,电镜结果显示条带中的心肌细胞含有丰富的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见.用含0.04%EDTA的0.25%胰酶制备的原代乳鼠心肌细胞构建的心肌条带,拉伸后第4天形成一致性跳动.免疫组化检测提示肌钙蛋白阳性细胞数多于对照组.电镜观察显示,条带的心肌细胞中肌原纤维较对照组明显增多.结论这一方法可构建工程化心肌组织,心肌细胞制备方法的改进以及液态Ⅰ型胶原浓度的精确测定,可显著提高构建心肌条带的成功率及条带的生理功能,使其更接近正常心肌组织.
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新生大鼠原代心肌细胞分离方法的改进
目的 对传统的原代乳鼠心肌细胞分离方法进行改良,获得活性好、纯度高、反应性好的原代乳鼠心肌细胞.方法 利用断头开胸取心法取新生24 h内的Wistar大鼠心肌组织,无菌剪碎后用0.25％不含EDTA胰酶混合Ⅱ型胶原酶消化法,采用自制消化组合装置分离消化细胞.逐日在倒置相差显微镜下观察细胞状态.采用心肌细胞特异性蛋白α-横纹肌肌动蛋白(α-actin)单克隆抗体对培养的心肌细胞进行免疫荧光鉴定.另外使用异丙肾上腺素和去甲肾上腺素作用于细胞,观察细胞反应情况.结果 培养后24 h即可观察到部分细胞搏动,可初步确定为心肌细胞;48 h后细胞逐渐展开,连续观察20 d,发现心肌细胞在3～14d期间搏动频率与形态无明显变化.对比观察发现断头开胸取心法获取的原代心肌细胞中红细胞数量明显减少.免疫荧光鉴定发现,本方法获得的心肌细胞纯度高达95％.此外,分离的原代乳鼠心肌细胞对异丙肾上腺素和去甲肾上腺素反应灵敏.结论 断头开胸取心法配以混合酶液消化心脏组织分得的原代乳鼠心肌细胞反应性好、纯度高、有活力,可满足大多数实验的要求.
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大株红景天注射液对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
[目的]观察大株红景天注射液抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其抗心肌缺氧/复氧可能的机制.[方法]原代培养的心肌细胞随机分为5组:空白对照组;缺氧/复氧组;缺氧/复氧分别加大株红景天注射液5、10、20 mL/L组.加药孵育12 h后,缺氧培养9 h,随后常氧培养2 h.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,CMH2DCF-DA荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成量,JC-1荧光探针检测细胞内线粒体膜电位,以及测定细胞内超氧化物歧化酶SOD活力及其基因表达量.[结果]大株红景天注射液增加了缺氧/复氧损伤心肌细胞的活力,减少细胞内ROS的生成,抑制细胞内线粒体膜电位的降低,同时增加了心肌细胞内SOD的活力及其基因表达量.[结论]大株红景天注射液对缺氧/复氧(H/R)损伤的心肌细胞有保护作用.
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催产素诱导下ES源性心肌样细胞与原代小鼠心肌细胞特性比较研究
目的 研究催产素诱导下的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)源性心肌样细胞与原代小鼠心肌细胞在生理学特性及标志物表达上的差异. 方法 ES细胞(S6)经复苏、传代,在体外经催产素诱导下向心肌细胞分化,诱导后第10天,分化细胞经心肌标志物α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、肌钙蛋白T(cTnT)细胞免疫荧光学染色后,荧光显微镜及光镜下观察其细胞形态和染色结果;通过Western bolt方法分析α-sarcomeric actin、cTnT、心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)的表达情况;在电镜下观察分化细胞及小鼠原代心肌细胞的特异性结构,比较分化细胞与原代小鼠各项指标的差异. 结果 催产素诱导的胚胎干细胞源性心肌样细胞cTnT、α-横纹肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性,ANF、cTnT、α-横纹肌肌动蛋白表达两组比较均无明显差异(P＞0.05);电镜下观察ES源性心肌样细胞可见排列整齐的肌原纤维、肌小节结构和Z带、以及缝隙连接、桥粒连接. 结论 催产素诱导下ES源性心肌样细胞与原代小鼠心肌细胞在标志物表达及生理学特性上无明显差异.
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重组人生长停滞特异性蛋白6对缺氧/复氧原代心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响
目的 研究外源重组人生长停滞特异性蛋白6(rhGas6)对缺氧/复氧(H/R)诱导的原代乳鼠心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响.方法 体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞及H9c2细胞,随机各分为3组:正常组、H/R组及rhGas6预处理组(rhGas6组).观察各组细胞形态及心肌细胞搏动频率,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)浓度及半胱氨酸蛋白酶( Caspase-3)活性变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 原代心肌细胞及H9c2细胞H/R组均较正常组细胞活力下降,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均较正常组增高.而Gas6组与H/R组比较,细胞活力增加,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均减低(P＜0.D5).结论 rhGas6对H/R诱导的原代心肌细胞及H9c2细胞损伤均发挥着潜在的保护作用,并可能是通过抑制Caspase-3活性减少细胞凋亡发挥的.
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环孢素A对高糖状态下七氟醚后处理大鼠心肌细胞保护作用的影响
目的 明确环孢素A(CsA)能否通过抑制线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,并维持线粒体形态恢复七氟醚后处理(SPostC)对高糖培养心肌细胞的保护作用.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分别在低糖与高糖浓度下培养48 h后接受缺氧复氧损伤.缺氧前给予CsA或者再灌注前给予SPostC,或二者联合应用,观察心肌细胞复氧后的死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)水平、线粒体形态改变及线粒体膜电位变化.结果 SPostC与CsA均降低了缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率,增加了缺氧/复氧损伤后的线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平(P＜0.05),二者联合并未进一步增强保护作用.高糖(35 mmol/L)加剧了心肌细胞缺氧/复氧损伤,高糖浓度下,上述保护作用均消失.与高糖组相比,SPostC、CsA及二者联合均未能降低缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率(P＞0.05),线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平变化差异也无统计学意义.结论 CsA和SPostC均能够通过调节线粒体形态抵抗缺氧/复氧损伤,高糖时保护作用消失,联合CsA无法恢复其保护效应.
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激动线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的大鼠心肌细胞MMP-14及TIMP-4的影响
目的 探讨基质金属蛋白酶14( MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4( TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤.方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型.实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L-1)、NG + ALDH2激动剂Alda-1 组、高糖组(HG,30 mmol·L-1),HG + Alda-1组. MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达.结果 根据细胞活力检测确定30 mmol·L-1葡萄糖干预48 h为损伤模型.与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、AL-DH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低.结论 激动ALDH2 可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关.
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原代心肌细胞培养
目的:探讨SD大鼠乳鼠心肌细胞的分离及培养方法,并进行形态学观察.方法:取出生1～3d的SD大鼠的乳鼠,胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,差速贴壁法分离心肌细胞,并加入适量BrdU纯化心肌细胞,显微镜下观察心肌细胞形态及纯度,结果:成功分离培养心肌细胞并观察其形态,计算存活率92％,纯度90％,2～3d出现同步搏动.结论:胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶消化可分离存活率较高的心肌细胞,用差速贴壁法并加入适量BrdU可纯化心肌细胞,使细胞搏动良好.
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二甲双胍对H2O2刺激的原代心肌细胞活性的影响
目的:观察二甲双胍对H2O2刺激的原代培养心肌细胞活性的影响.方法:利用乳鼠心室肌组织培养出大鼠原代心肌细胞,分别用不同浓度(0、1、10、100、1 000、3 000、5 000、10 000 μmol/L)的二甲双胍孵育0、15、30、60、120和180 min,然后再与100 μmol/L H2O2共孵育12 h,MTT法检测细胞活性.结果:当二甲双胍作用浓度从0增加到100 μmol/L,再增加到10 000 μmol/L时,H2O2刺激的心肌细胞活性先逐渐升高,后逐渐降低(F浓度=293.536,P<0.001);随二甲双胍作用时间的延长,H2O2刺激的心肌细胞活性逐渐升高(F时间=185.438,P<0.001).进一步的观察结果显示,H2O2明显损伤原代心肌细胞的活性,100 μmol/L二甲双胍作用60 min可明显提高损伤细胞的活性(FH2O2=337.026,F二甲双胍=151.797,F交互=414.378,P均<0.001).结论:低浓度二甲双胍对心肌细胞有明显的保护作用,可对抗活性氧对心肌细胞的损伤.
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血红素氧和酶-1在原代心肌细胞缺氧/复氧损伤中的表达及意义
目的 探讨血红素氧和酶-1(HO-1)在姜黄素对原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后处理中的表达及意义.方法 实验分为5组:正常对照组、姜黄素组(10μmol/L)、H/R组、姜黄素(10μmol/L)+ H/R组、姜黄素+ZnPP-Ⅸ(HO-1抑制剂)+H/R组.检测细胞活性及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性,评估细胞损伤情况;检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3凋亡酶活性;JC-1探针检测细胞膜电位;通过Western blot检测各组细胞HO-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达.结果 与H/R组比较,姜黄素可以诱导HO-1和bcl-2的表达,抑制bax的表达,加入ZnPP-Ⅸ后,HO-1和bcl-2表达减弱,bax表达上调(P=0.001、0.006、0.007).与对照组比较,H/R组线粒体膜电位显著降低(31±7)%比100%(P=0.004),姜黄素后处理可以提高线粒体膜电位(75±16)%比(31±7)%(P=0.011),而加入ZnPP-Ⅸ阻断了姜黄素对心肌细胞的保护作用(19±4)%比(75±16)%(P=0.001).姜黄素同时具有增加心肌细胞活性和SOD活性,降低LDH、MDA浓度,及降低Caspase-3活性,降低细胞损伤、氧化应激损伤和凋亡.结论 姜黄素可通过诱导HO-1表达,减轻氧化应激及抗凋亡而具有心肌细胞保护作用,而HO-1抑制剂ZnPP-Ⅸ可以阻断姜黄素的心肌保护作用.
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不同浓度姜黄素后处理对原代心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 制备原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型,探讨姜黄素后处理对H/R损伤保护作用的佳浓度.方法 实验分为5组:正常对照组;H/R组;姜黄素不同浓度(1、5、10 μmol/L)+H/R组.通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性,评估细胞损伤;通过原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率.结果 与对照组比较,H/R组细胞活性降低(P=0.001),各浓度姜黄素组显著增强细胞活性,尤以10 μmol/L组效果好(P=0.017);与H/R组比较,各浓度姜黄素组显著降低LDH活性,显著降低MDA浓度,显著提高SOD活性,明显改善H/R损伤后的心肌细胞凋亡率,其中均以10 μmol/L组效果明显(P=0.011、0.001、0.009、0.007),且与对照组比较差异无统计学意义(P=0.129、0.083、0.134).结论 在造模成功的基础上,不同浓度姜黄素后处理均具有保护心肌细胞损伤,抗氧化应激,抗凋亡的作用,尤以10 μmol/L效果好,为佳药物浓度.
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哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡的影响
目的:研究α受体拮抗剂哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞凋亡的影响.方法:采用噻唑蓝(MTT)法分析原代培养心肌细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)外漏实验和吉姆萨染色实验观察原代心肌细胞损伤;JC-1免疫荧光实验检测线粒体膜电位变化;Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:NE(100 μmol· L-1)作用于原代培养心肌细胞48 h,细胞存活率降低;LDH外漏增加;细胞形态改变,细胞数减少、胞体膨大、胞核居中、胞间间隙增大,呈明显病理学特征;线粒体膜电位降低;心肌细胞凋亡率增加.哌唑嗪明显改善去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞损伤,增加MTT值、降低LDH外漏量、改善心肌细胞病理形态、增加心肌细胞线粒体膜电位、降低心肌细胞凋亡率(P＜0.05或P＜0.01).结论:哌唑嗪能显著抑制去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,本实验为α受体阻断剂改善高交感诱导心肌细胞凋亡提供实验基础与理论指导.
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吡格列酮抑制体外高糖培养乳鼠心肌细胞炎症作用的研究
目的：探讨吡格列酮对高糖培养乳鼠心肌细胞炎症的抑制作用。方法 SD乳鼠原代心肌细胞培养至90％融合，换上无血清的DMEM培养基，并随机将细胞分为正常组、高糖模型组、吡格列酮低剂量组（10μmol／L）和高剂量组（20μmol／L），继续培养48h后，分别收集细胞培养液及心肌细胞，检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、炎症因子IL－6、TNF－α的含量以及心肌细胞中蛋白P38MAPK的表达量和NF－κB的活性。结果高糖下的细胞经吡格列酮药物处理后LDH、IL－6、TNF－α的含量、P38MAPK的表达量和NF－κB的活性均明显下降。结论吡格列酮能抑制高糖培养下心肌细胞炎症作用。
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抗心律失常肽对抗柯萨奇 B3病毒的体外研究
目的：观察抗心律失常肽（AAP10）对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染的原代小鼠心肌细胞的保护作用。方法将BALB／C小鼠原代心肌细胞分为7组，每组12孔，分别为细胞对照组，病毒对照组，药物干预组（A组、B组、C组、D组、E组）。用不同浓度的AAP10培养液干预100 TCID50 CVB3感染的心肌细胞，对比每组的细胞活性。结果药物干预组细胞活性高于病毒对照组（ F＝7．489，P＜0．05）。其细胞活性与药物浓度（ r＝0．942，P＝0．005）及作用时间（ r＝0．993，P＜0．05）均呈正相关。结论 AAP10具有明显的抗病毒活性，呈剂量时间相关性，对CVB3感染的心肌细胞有保护作用。
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伤肌宁胶囊含药血清对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用研究
目的:研究伤肌宁胶囊舍药血清对阿霉素(ADR)所致心肌细胞顿伤的保护作用.方法:以SD乳鼠心肌细胞做原代培养,复制ADR损伤心肌细胞模型,测定培养上清液中多项生化指标,并运用流式细胞仪检测凋亡细胞.结果:ADR(终浓度为10-6mol·L-1)可致上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放量增加,同时细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力下降而丙二醛(MDA)含量升高;高、中、低剂量伤肌宁胶囊均可降低LDH活力,增加细胞SOD活力和降低MDA含量.流式细胞仪检测伤肌宁胶囊能降低心肌细胞凋亡率.结论:伤肌宁胶囊能够拮抗ADR引起的心肌细胞自由基脂质过氧化,抑制心肌细胞的凋亡,具有保护心肌细胞损伤的作用.
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黄芪甲苷对D-半乳糖诱导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制研究
目的:研究黄芪甲苷对D-半乳糖(D-gal)诱导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制.方法:分离和培养Wistar乳鼠原代心肌细胞,将细胞分为正常对照组(无血清DMEM高糖培养基)、D-gal组(含5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基)和黄芪甲苷低、中、高质量浓度组(分别先以含25、50、100μg/mL黄芪甲苷的无血清DMEM高糖培养基培养1 h,然后换为含有相应质量浓度黄芪甲苷和5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基).采用CCK-8法检测培养48 h后细胞活性,分别采用Hoechst染色法(培养24 h)和流式细胞术(培养48 h)考察细胞凋亡情况,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测培养24 h后细胞中凋亡相关因子(Bcl-2、Bax、Caspase-3)和心房钠尿肽(ANP)mRNA表达水平.结果:与正常对照组比较,D-gal组细胞的活性以及细胞中Bcl-2 mRNA水平、Bcl-2/Bax比值降低,细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3、ANP mRNA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与D-gal组比较,黄芪甲苷各浓度组细胞的活性以及细胞中Bcl-2 mRNA水平、Bcl-2/Bax比值均升高,细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3、ANP mRNA水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且具有一定浓度依赖性.结论:黄芪甲苷对D-gal诱导的原代心肌细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax比值和下调细胞中Cas-pase-3、ANP mRNA的表达有关.
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体外构建工程化心肌片层的实验研究
目的 探索在体外构建工程化心肌片层的方法.方法 用胶原、Matrigel、2倍DMEM分别与制备的乳鼠原代心肌细胞混合,注入方形槽内形成心肌片层,5 d后行动态力学拉伸继续培养1周.常规HE染色、免疫组化染色等对组织工程化心肌组织,即心肌片层进行评价.结果 心肌片层在培养1 d出现点状自发性跳动,随时间的延长跳动的区域逐渐增多,强度逐渐增大,3 d出现不一致的局部跳动,拉伸2 d出现肉眼可见整个片层的一致性的节律性跳动.HE染色显示片层中细胞排列整齐与正常成年大鼠心肌组织类似,免疫组化结果显示有丰富的心肌细胞.电镜显示条带中的心肌细胞含有丰富的肌原纤维,肌节结构和Z线清晰可见.结论 该方法可以成功构建类似天然心肌组织的工程化心肌片层.
