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清络通痹方与精简方的药效学比较
目的:探讨清络通痹方精简前后的药效学作用及影响机制.方法:DBA/1小鼠,复制胶原性关节炎(CIA)模型,随机分为空白组,模型组,清络通痹精简方组(8.4 g·kg-1),清络通痹原方组(13 g·kg-1)及雷公藤多苷片组(9 mg·kg-1),观察一般情况及关节肿胀,ig给药4周后,检测血清中白介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),抗Ⅱ型胶原抗体(抗CⅡ抗体)含量;踝关节HE染色观察病理学改变及病理评分.结果:与正常组比较,模型组小鼠关节肿胀明显,关节炎评分,TNF-α,IL-1β和抗CⅡ抗体水平明显升高(P＜0.01);与模型组比较,清络通痹精简方及原方、雷公藤多苷均能明显抑制小鼠足肿胀,降低关节炎评分,降低血清中TNF-α,IL-1β和抗CⅡ抗体水平(P＜0.01,P＜0.05);病理学检查提示可减轻关节病理损伤,关节总病理评分降低(P＜0.01).结论:清络通痹精简方将不同性味、不同功效药物合理配伍,治疗效果和作用机制与原方相似.
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清络通痹方中雷公藤配伍减毒的化学基础研究
目的:通过研究清络通痹方中雷公藤配伍其他药味后,雷公藤中毒性成分雷公藤甲素的溶出规律,从化学角度探索其配伍减毒的物质基础,为雷公藤的临床应用提供实验依据.方法:结合“组分剔除法”、“药味组合法”,采用高效液相色谱法测定清络通痹全方、雷公藤各配伍组合中雷公藤甲素溶出含量.在此基础上,进一步对雷公藤药材、雷公藤单味药、雷公藤配伍三七、雷公藤配伍青风藤进行化学成分的全成分分析,比较雷公藤中雷公藤甲素等成分的溶出变化.结果:在雷公藤投料量相同的情况下,雷公藤甲素溶出的趋势为:全方去三七＞全方去青风藤＞全方去地黄＞全方去僵蚕＞全方;青风藤配伍雷公藤＞单味雷公藤＞地黄配伍雷公藤＞僵蚕配伍雷公藤＞三七配伍雷公藤;统计分析表明,三七能明显降低雷公藤甲素溶出(P＜0.05),青风藤能显著增加雷公藤甲素溶出(P＜0.05).全成分分析研究中,雷公藤配伍三七,配伍青风藤后与雷公藤药材及单味药提取物相比,溶出规律与前述结果一致.结论:通过清络通痹方中雷公藤配伍前后化学成分的溶出含量变化可以初步推断,三七配伍雷公藤能降低雷公藤的毒性,而青风藤配伍雷公藤能增强雷公藤的毒性.该研究结果为雷公藤的临床配伍减毒应用提供了实验依据.
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基于“异类相制”的雷公藤复方配伍减毒代谢组学研究
采用基于气相色谱质谱联用技术(GC-MS/MS)的代谢组学方法,分析雷公藤复方配伍前后对大鼠血浆中内源性代谢物的变化,以期阐明基于“异类相制”中医理论的清络通痹方对雷公藤的配伍减毒机制.通过GC-MS/MS分析获得空白对照组、雷公藤组和清络通痹方组大鼠血浆代谢轮廓,正交偏小二乘法-判别分析(OPLS-DA)显示3组在得分图上区分明显,.清络通痹方组各观测值存在着向正常组移动的趋势,提示了清络通痹方的配伍减毒功效.通过变量重要性投影(VIP)值和单因素方差分析筛选差异性代谢物,发现雷公藤组中生糖氨基酸包括丙氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、脯氨酸等水平显著升高,支链氨基酸缬氨酸和异亮氨基酸水平下降,清络通痹方则能够逆转氨基酸水平的紊乱.进一步的代谢通路分析提示清络通痹方配伍减毒机制可能与谷氨酸和谷氨酰胺代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢相关.该研究从代谢的角度,说明了雷公藤肝脏毒性的发生与氨基酸代谢,能量代谢等过程密切相关,而清络通痹方通过改善机体氨基酸水平发挥配伍减毒作用.
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清络通痹方对佐剂性关节炎大鼠破骨细胞分化相关miRNA表达的影响
目的 观察清络通痹方(Qingluo Tongbi Compound,QTC)对佐剂性关节炎(adjuvant induced arthritis,AIA)大鼠骨破坏相关miRNA表达的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制.方法 建立AIA大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型,应用miRNA芯片的方法初步筛选破骨细胞分化后期miRNA的异常表达谱,并采用实时定量PCR(RT-PCR)对芯片结果进行验证.制备QTC含药血清和空白血清,将破骨细胞随机分为空白组、空白血清组及QTC组,采用RT-PCR检测QTC对差异表达miRNA的影响,并应用生物信息学软件对关键性miRNA进行分析.结果 与单核细胞比较,破骨样细胞分化过程中存在明显差异表达的miRNAs共211个,其中表达上调88个,表达下调123个.RT-PCR验证结果与芯片检测结果表达趋势一致.RT-PCR结果显示,QTC干预后miR-140-5p表达明显上调,生物信息学分析结果显示miR-140-5p靶基因显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、Ras信号通路、cAMP信号通路和Rap1信号通路等信号通路上.结论 破骨样细胞分化后期存在多种miRNAs失调,QTC可能通过影响miR-140-5p的表达参与调控破骨细胞的分化.
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清络通痹方调控miRNA网络干预类风湿关节炎的研究
目的：观察清络通痹方（QLT）对胶原性关节炎（CIA）小鼠miRNA网络的调控作用，探讨其干预类风湿关节炎的机制。方法：DBA／1小鼠，复制CIA模型，随机分为空白对照、CIA、QLT组，采用miRCURYTM LNA Array芯片技术筛选外周血miRNA异常表达谱，以Realtime PCR对异常变化的miRNAs进行验证，并利用多种生物信息学软件进行分析。结果：与空白对照组比较，CIA小鼠具有差异表达的miRNAs有221个；与CIA比较，QLT差异表达的miRNAs有169个。 RT-PCR验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。 PCR结果显示CIA中miR-143下调明显，而QLT干预可明显上调miR-143的表达水平。 miR-143靶基因显著富集在VEGF、T细胞受体、MAPK信号通路等信号通路中。结论：多种miRNA的异常表达参与CIA的病理过程，QLT可能通过干预miRNA调控网络，多环节、多途径干预RA免疫、炎症、疼痛等多种病理过程，miR-143可能作为QLT治疗RA的重要环节。
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清络通痹方对小鼠疼痛行为及 DRG 中 COX-2表达和血 PGE2的影响
目的：观察清络通痹方对疼痛模型和胶原关节炎(CIA)小鼠模型的疼痛行为的影响，及背根神经节(DRG)环氧合酶(COX)-2 mRNA 及血前列腺素 E2(PGE2)含量的影响，初步探讨清络通痹方干预类风湿关节炎疼痛的作用及可能机制。方法采用热板和醋酸扭体致痛模型，分为空白对照组、塞来昔布组(30 mg/kg)、清络通痹低剂量组(4.35 g/kg)、中剂量组(8.70 g/kg)、高剂量组(17.4 g/kg)，观察各组痛阈值和扭体次数的改变。DBA/1小鼠，复制 CIA 模型，随机分为空白对照组、模型组、清络通痹方组(8.7 g/kg)及塞来昔布组(30 mg/kg)，观察一般情况及关节肿胀，各组机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射阈值(TWL)的变化，灌胃给药4周后，检测 DRG COX-2 mRNA 及血清 PGE2含量。结果清络通痹方使小鼠热板法致痛模型痛阈值提高、醋酸扭体法致痛模型扭体次数减少(P <0.01)；可显著减轻 CIA 小鼠足肿胀(P <0.05)，提高其 MWT(P<0.01)和 PWL(P <0.05)阈值，降低 DRG 中 COX-2 mRNA 的表达(P <0.05)和血 PGE2的含量(P <0.05)。结论清络通痹方具有一定的镇痛作用，其镇痛机制可能与抑制 DRG 中 COX-2 mRNA 表达和血清中 PGE2含量相关。
