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烟草烟雾凝集物对BEAS-2B细胞caspase-1及相关炎性细胞因子表达的影响
目的 观察烟草烟雾凝集物CSC(cigarette smoke condensate,CSC)刺激永生化人支气管上皮细胞(Immortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B),其caspase-1及相关炎性细胞因子的改变.方法 分别以终浓度为0 mg/ml(空白对照与DMSO溶剂对照)、0.015 mg/ml(1/4 IC50)、0.03mg/ml(1/2 IC50)及0.06 mg/ml(IC50)的CSC溶液作用于BEAS-2B细胞8、16和24 h,检测caspase-1活性,并用ELISA方法检测细胞内caspase-1活性及含量和细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的水平.结果 随CSC刺激浓度增加,BEAS-2B细胞抑制率增大,CSC对BEAS-2B细胞的半数抑制浓度约为0.06 mg/ml.不同浓度CSC处理细胞8和16 h后,1/4IC50、1/2IC50与IC50组caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),且随染毒浓度增高而增高(P＜0.05);不同浓度CSC处理细胞24h后,各染毒组细胞caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),但1/2IC50组与IC50组caspase-1活性及含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CSC处理BEAS-2B细胞可引起caspase-1活化,且IL-1β、IL-18表达水平增高,提示可能存在caspase-1依赖的细胞焦亡(pyroptosis).
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烟草烟雾暴露对气道上皮细胞转分化改变的初探
目的:观察烟草烟雾暴露人气道上皮细胞(16HBE)后,发生间充质转分化(EMT)样改变.方法:(1)以不同浓度(5～50μg/mL)CSC刺激16HBE 7 d,用CCKit-8检测细胞总体活性,筛选佳浓度.(2)用CSC大活性影响浓度刺激16HBE 7 d,观察细胞形态改变,经Western-blot法和细胞免疫荧光技术检测上皮细胞标志物E钙黏蛋白(E-cad)及EMT标记物1型胶原(COL1)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平.结果:(1)不同浓度CSC刺激后,16HBE在10μg/mL时OD值高,为(2.562±0.045).各浓度间OD值比较差异均有统计学意义(P<0.05).(2)经10μg/mL CSC刺激后,部分16HBE形态由鹅卵石状向长梭形、多角形或星形改变.(3)Western-blot检测发现试验组COL1、MMP-9的蛋白表达量分别为(0.566±0.011)和(0.463±0.003),高于对照组(0.272±0.020)和(0.201±0.023),差异均有统计学意义(P<0.05);而E-cad蛋白表达量则明显低于对照组,分别为(0.301±0.041)和(0.591±0.068),差异有统计学意义(P<0.05).(4)细胞免疫荧光检测发现试验组COL1、Vimentin和MMP-9蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);而E-cad蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05).结论:经CSC刺激后,16HBE可出现转分化样改变.
关键词： 烟草烟雾凝集物 气道上皮细胞 上皮细胞间充质转分化
